| 查看: 1829 | 回复: 5 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
LeonardoChen金虫 (小有名气)
|
[求助]
重组质粒转化后提的平板有很多菌落，但是菌落PCR 没有结果。 已有3人参与
|
|
|
重组质粒PET28a，转化到大肠杆菌（BL21），涂布到平板，37℃，培养14h左右，单菌落数有很多然后随机挑取10单菌落，加入50微升无菌水，煮沸40min，做菌落PCR，第一次pcr体系是：10微升buffer ，1微升Taq ，1微升dNTP MIX ，1微升T7引物 ，1微升T7Terminator ，86微升无菌水。分装每管9微升，再加入1微升煮沸的菌液，进行PCR，跑胶结果显示有阳性克隆，但是测序结果显示都是假阳性。 第二次尝试用另一种方法：10微升buffer ，1微升Taq ，1微升dNTP MIX ，1微升T7Terminator ，1微升引物R（就是自己刚开始做克隆设计的引物） ，86微升无菌水。分装每管9微升，再加入1微升煮沸的菌液，进行PCR，跑胶结果显示都没有阳性克隆。 PCR反应条件：95℃ 5min，Sample Text 72℃ 10min，4.0℃ pause 各位能不能帮我分析下，为什么单菌落那么多却没有阳性克隆，如果是实验操作的原因最可能会出现在哪一步？谢谢，不甚感激！ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有104人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 基因敲除第一步同源重组后用上下游基因的两头引物同时扩增怎么只出现了一个条带
已经有5人回复
- 重组质粒转化后提的平板有很多菌落，但是菌落PCR 没有结果。
已经有6人回复
- pET 28α在DH5α中摇菌18个小时，菌浓度低，质粒得量低是怎么个情况啊？
已经有22人回复
- 急 分子克隆遇到问题
已经有9人回复
- 转化后单克隆都一样吗
已经有13人回复
- 基因工程课程小结
已经有20人回复
- 质粒转化到大肠杆菌野生菌中验证遇到的非常非常怪的问题
已经有3人回复
- 蓝白斑筛选
已经有2人回复
- 目的基因连接pGEX-6p-1进行转化的问题
已经有14人回复
4楼2015-10-12 14:01:02
2楼2015-09-27 22:59:35
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-12 13:40:31
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-12 13:40:31
|
本帖内容被屏蔽 |
3楼2015-10-12 13:19:54
高gaoeryang
银虫 (小有名气)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 324.2
- 散金: 300
- 红花: 3
- 帖子: 116
- 在线: 262.5小时
- 虫号: 2042656
- 注册: 2012-10-04
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
5楼2015-10-12 17:24:09
