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聚丙烯酰胺凝胶电泳灌胶技巧 已有12人参与
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亲爱的们，帮帮我吧，现在刚开始学习变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，但在刚开始灌胶就出了问题，总是有气泡。不知道是哪里出了问题？求助啊，谢谢。不胜感激！ T)QYM]%(SN_$XTAM@)NL48R.jpg |
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lf8306887
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
| 这方面哥是绝对的权威，这个胶是用来做变性胶的，用于SSR分子标记，这个哥哥以前做博士做了三年，每天8块胶，每个胶板单次上样64个左右，SSR标记较集中的引物，可以间隔15分钟进行二次上样，这样每一块胶能跑128个样品，使用4%的浓度，大概需要跑1个小时，首先预热到42度，做胶是个技术活，每块胶大概需要50毫升液体胶。对于灌胶，首先玻璃板必须干净，不干净的可以用高浓度氢氧化钠侵泡，灌胶时把玻璃板倾斜30-45度，用尖嘴烧杯灌胶，注意一定要连续不能断，这是关键，有不明白的，只要是这方面的做胶、SSR数据分析、软件的使用，都可以来找哥，哥哥只搭理美女，哈哈 |
7楼2015-09-25 14:53:04
小小鸟fq
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【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-09-22 22:17:20
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-09-22 22:17:20
| 楼主是指做蛋白质免疫印迹吗？我最近在做这个，几乎没有出现过气泡，希望能和你分享我的方法。用枪头灌胶（分离胶）时候沿着板的一端缓慢注入，尽量不要打进去太多气泡，有些小气泡时也不太要紧，胶板垂直放置时一般会自动浮上来，灌胶结束后可以立刻加异丙醇（ddH2O也可以）封闭压线，这样也能逼出气泡，而且分离胶平面也会比较平直。之后就不要碰胶板了，现在室温下大概20~30min分离胶就凝固了，倒掉异丙醇并倒置控干，然后再配置浓缩胶，也是沿一侧缓缓加入，加到溢出为止，将事先准备好的上样梳迅速插入，注意梳子应平直，等待自然凝固，再小心拔出梳子。说了这么多，注意事项有二：1.板架要放在水平桌面上，加样至凝胶过程不要随意挪动；2.灌入分离胶后加入异丙醇压线，基本上不会出现气泡。祝你好运! |
3楼2015-09-22 20:25:56
10楼2015-09-28 16:14:39
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1.板要洗干净，不仅要干净还要干燥。 2.倒的时候沿壁缓缓倒，一边倒一边缓慢倾斜直到满了刚刚平放在那个白白的架子（？）上。 3.插梳子要仔细，一不小心就把气泡挤进去了。 4.发现气泡用那个细细的玻璃条人抱歉我不知道怎么形容）伸进去弄出来。 发自小木虫Android客户端 |
12楼2015-09-28 16:43:34
28楼2015-09-29 15:41:11
30楼2015-09-30 09:35:21
31楼2015-09-30 09:37:32
37楼2015-10-06 13:03:53
Neo2000
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2楼2015-09-22 20:02:29
jjxyygx
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4楼2015-09-23 00:43:50
5楼2015-09-23 00:47:50
6楼2015-09-23 09:37:50
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9楼2015-09-28 16:07:59