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没有什么大不了的。。。

1楼 2015-09-22 16:47:42

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lf8306887

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这方面哥是绝对的权威，这个胶是用来做变性胶的，用于SSR分子标记，这个哥哥以前做博士做了三年，每天8块胶，每个胶板单次上样64个左右，SSR标记较集中的引物，可以间隔15分钟进行二次上样，这样每一块胶能跑128个样品，使用4%的浓度，大概需要跑1个小时，首先预热到42度，做胶是个技术活，每块胶大概需要50毫升液体胶。对于灌胶，首先玻璃板必须干净，不干净的可以用高浓度氢氧化钠侵泡，灌胶时把玻璃板倾斜30-45度，用尖嘴烧杯灌胶，注意一定要连续不能断，这是关键，有不明白的，只要是这方面的做胶、SSR数据分析、软件的使用，都可以来找哥，哥哥只搭理美女，哈哈

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菲戈

7楼2015-09-25 14:53:04

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小小鸟fq

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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-09-22 22:17:20

楼主是指做蛋白质免疫印迹吗？我最近在做这个，几乎没有出现过气泡，希望能和你分享我的方法。用枪头灌胶（分离胶）时候沿着板的一端缓慢注入，尽量不要打进去太多气泡，有些小气泡时也不太要紧，胶板垂直放置时一般会自动浮上来，灌胶结束后可以立刻加异丙醇（ddH2O也可以）封闭压线，这样也能逼出气泡，而且分离胶平面也会比较平直。之后就不要碰胶板了，现在室温下大概20~30min分离胶就凝固了，倒掉异丙醇并倒置控干，然后再配置浓缩胶，也是沿一侧缓缓加入，加到溢出为止，将事先准备好的上样梳迅速插入，注意梳子应平直，等待自然凝固，再小心拔出梳子。说了这么多，注意事项有二：1.板架要放在水平桌面上，加样至凝胶过程不要随意挪动；2.灌入分离胶后加入异丙醇压线，基本上不会出现气泡。祝你好运!

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3楼2015-09-22 20:25:56

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郭盼盼

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7楼: Originally posted by lf8306887 at 2015-09-25 14:53:04
这方面哥是绝对的权威，这个胶是用来做变性胶的，用于SSR分子标记，这个哥哥以前做博士做了三年，每天8块胶，每个胶板单次上样64个左右，SSR标记较集中的引物，可以间隔15分钟进行二次上样，这样每一块胶能跑128个样 ...

您好！我是做SSCP的，我经常遇到的问题就是拔梳子时梳子孔高于梳子孔底部有一层胶，每次还得用注射器吸打，搞得不好还容易把胶打破，这点一直都难以克服，不知道您有没有好的解决办法

坚持该坚持的

10楼2015-09-28 16:14:39

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阿维victor

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1.板要洗干净，不仅要干净还要干燥。
2.倒的时候沿壁缓缓倒，一边倒一边缓慢倾斜直到满了刚刚平放在那个白白的架子（？）上。
3.插梳子要仔细，一不小心就把气泡挤进去了。
4.发现气泡用那个细细的玻璃条人抱歉我不知道怎么形容）伸进去弄出来。

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12楼2015-09-28 16:43:34

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slina0925

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22楼: Originally posted by 杜仲谷 at 2015-09-29 12:40:30
不知道您做变性PAGE胶时，loading buffer是怎么配的？我自己配置了一份loading buffer，可能是因为放了4℃冰箱放了半年的原因，点样时，PCR产物沉不下去，总是容易从点样孔漂出来，即使我观察到，我做的非常细致，将 ...

电泳缓冲液需要1乘的TBE，如果浓度高也会出现沉降不下去的现象，那个Loading Bffer 是在生工上买的，您可以直接电话咨询一下，是2乘的SSCP，您在详细咨询下吧，希望对您有帮助

没有什么大不了的。。。

28楼2015-09-29 15:41:11

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郭盼盼

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我做的变性胶loading buffer 配方是甲酰胺95ml ， 10mmol 的EDTA（PH8.0) 2ml，二甲苯氰0.09g，溴酚蓝0.09g，加水至100ml, 效果还不错，没有出现过一次你说的那样飘样的情况，你可以参考一下

坚持该坚持的

30楼2015-09-30 09:35:21

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郭盼盼

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还有应该不是时间的问题，我之前是在过年之前配置的，现在都十月份了还是OK的，你之前刚配好的时候可以用吗？如果刚开始可以用，后来不行再考虑重配，不过配这个也麻烦

坚持该坚持的

31楼2015-09-30 09:37:32

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凡人凡语1

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戴上防毒面具做了上百板，活下来了。

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37楼2015-10-06 13:03:53

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Neo2000

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一句话，练习的不够呗，功夫出自有心人

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2楼2015-09-22 20:02:29

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jjxyygx

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熟能生巧，做多了就会。

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4楼2015-09-23 00:43:50

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长得帅真好

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我大二的时候做这个实验时是有点不好不平但是没有气泡产生应该是实验操作不太平稳吧。

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5楼2015-09-23 00:47:50

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slina0925

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3楼: Originally posted by 小小鸟fq at 2015-09-22 20:25:56
楼主是指做蛋白质免疫印迹吗？我最近在做这个，几乎没有出现过气泡，希望能和你分享我的方法。用枪头灌胶（分离胶）时候沿着板的一端缓慢注入，尽量不要打进去太多气泡，有些小气泡时也不太要紧，胶板垂直放置时一般 ...

不是做的蛋白，是SSR标记分析，分开DNA条带的

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6楼2015-09-23 09:37:50

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谢谢高手，我已关注你，可以随时请教您吗

没有什么大不了的。。。

8楼2015-09-28 11:10:04

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你这个胶孔怎么那么小啊，可以试试大孔梳子，25孔1mm或者15孔的应该效果还不错吧，不过有气泡的原因应该是你倒的太快了，还有配制胶的过程中应该充分冷凉后再加APS和TEMED，这样就不会导致胶在灌制的过程中造成凝胶过快的现象，应该也会解决你这个有气泡的问题，我也在摸索中，好多问题解决不了，可以交流交流。。