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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 聚丙烯酰胺凝胶电泳灌胶技巧
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郭盼盼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 郭盼盼 at 2015-09-28 16:14:39
您好！我是做SSCP的，我经常遇到的问题就是拔梳子时梳子孔高于梳子孔底部有一层胶，每次还得用注射器吸打，搞得不好还容易把胶打破，这点一直都难以克服，不知道您有没有好的解决办法...

还有个问题就是你说的那种二次上样的事情，你可以停止电泳一二十分钟上第二次样吗？这样第一次上的样不会复性吗在你上第二次样的过程中？
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坚持该坚持的
11楼2015-09-28 16:30:34
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阿维victor

银虫 (小有名气)
1.板要洗干净，不仅要干净还要干燥。
2.倒的时候沿壁缓缓倒，一边倒一边缓慢倾斜直到满了刚刚平放在那个白白的架子（？）上。
3.插梳子要仔细，一不小心就把气泡挤进去了。
4.发现气泡用那个细细的玻璃条人抱歉我不知道怎么形容）伸进去弄出来。

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12楼2015-09-28 16:43:34
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杜仲谷

木虫 (职业作家)

金虫

【答案】应助回帖

楼主，我一看您的图，跟我以前一样，总是胶凝不好，产生气泡。
我也支持楼上的一位同学嘚观点，需要您在灌胶嘚时候，温度要降下来，降到室温，千万别42℃，温度高了，凝胶速度会非常快，且我时常发生还没灌完，胶就在100ml的小尖嘴烧杯里凝固了。
而且，这款型号的玻璃板，经常发生:拔梳子的时候，梳子上还会粘着点胶，造成点样孔不齐。

不知道你是否也遇到过类似的情况。

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从事分生的药学生
13楼2015-09-28 16:59:15
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杜仲谷

木虫 (职业作家)

金虫

【答案】应助回帖

后来，我不做变性胶了，改做非变性胶了，条带区分能力也不错，5个bp差异的也可以看出来。

附上一张我的变形胶产生气泡的图，我也推荐你做非变性胶吧。效果也不错。我的同学做小麦SSR的，都是非变性胶。
聚丙烯酰胺凝胶电泳灌胶技巧



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从事分生的药学生
14楼2015-09-28 17:02:43
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杜仲谷

木虫 (职业作家)

金虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by 杜仲谷 at 2015-09-28 16:59:15
楼主，我一看您的图，跟我以前一样，总是胶凝不好，产生气泡。
我也支持楼上的一位同学嘚观点，需要您在灌胶嘚时候，温度要降下来，降到室温，千万别42℃，温度高了，凝胶速度会非常快，且我时常发生还没灌完，胶就 ...

我也支持是因为凝胶速度太快，引起的气泡。
不知道您的TEMED以及 10％APS和胶的体积比例是多少？

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从事分生的药学生
15楼2015-09-28 17:05:29
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憨憨可爱多

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这个小心一点，胶板洗干净了，从边上倒应该不会有气泡产生的，

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16楼2015-09-28 17:16:17
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slina0925

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 郭盼盼 at 2015-09-28 16:14:39
您好！我是做SSCP的，我经常遇到的问题就是拔梳子时梳子孔高于梳子孔底部有一层胶，每次还得用注射器吸打，搞得不好还容易把胶打破，这点一直都难以克服，不知道您有没有好的解决办法...

我也是新手，不太明白您的问题。。。
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没有什么大不了的。。。
17楼2015-09-28 17:39:01
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郭盼盼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by slina0925 at 2015-09-28 17:39:01
我也是新手，不太明白您的问题。。。...

我问的就是那个高手，呵呵，你现在的问题解决了吗？
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坚持该坚持的
18楼2015-09-28 18:59:09
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slina0925

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 杜仲谷 at 2015-09-28 17:02:43
后来，我不做变性胶了，改做非变性胶了，条带区分能力也不错，5个bp差异的也可以看出来。
附上一张我的变形胶产生气泡的图，我也推荐你做非变性胶吧。效果也不错。我的同学做小麦SSR的，都是非变性胶。

...

请问，您在做变性胶的时候那个Marker用的是什么，在哪里买的，我联系好多家公司都没有卖专门做变性聚丙烯酰胺凝胶的Marker
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没有什么大不了的。。。
19楼2015-09-29 09:59:20
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slina0925

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 郭盼盼 at 2015-09-28 18:59:09
我问的就是那个高手，呵呵，你现在的问题解决了吗？...

多亏大家的帮助，已解决
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没有什么大不了的。。。
20楼2015-09-29 10:00:25
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