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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 聚丙烯酰胺凝胶电泳灌胶技巧
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郭盼盼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 杜仲谷 at 2015-09-29 12:40:30
不知道您做变性PAGE胶时，loading buffer是怎么配的？我自己配置了一份loading buffer，可能是因为放了4℃冰箱放了半年的原因，点样时，PCR产物沉不下去，总是容易从点样孔漂出来，即使我观察到，我做的非常细致，将 ...

还有应该不是时间的问题，我之前是在过年之前配置的，现在都十月份了还是OK的，你之前刚配好的时候可以用吗？如果刚开始可以用，后来不行再考虑重配，不过配这个也麻烦
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坚持该坚持的
31楼2015-09-30 09:37:32
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杜仲谷

木虫 (职业作家)

金虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
31楼: Originally posted by 郭盼盼 at 2015-09-30 09:37:32
还有应该不是时间的问题，我之前是在过年之前配置的，现在都十月份了还是OK的，你之前刚配好的时候可以用吗？如果刚开始可以用，后来不行再考虑重配，不过配这个也麻烦...

非常感谢！我也按照您的建议试试。

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从事分生的药学生
32楼2015-09-30 10:48:26
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杜仲谷

木虫 (职业作家)

金虫
引用回帖:
30楼: Originally posted by 郭盼盼 at 2015-09-30 09:35:21
我做的变性胶loading buffer 配方是甲酰胺95ml ， 10mmol 的EDTA（PH8.0) 2ml， 二甲苯氰0.09g，溴酚蓝0.09g，加水至100ml, 效果还不错，没有出现过一次你说的那样飘样的情况，你可以参考一下...

忘了问您，您加多少的loading buffer和多少ul的PCR产物混合在一起？
我是20ul的PCR产物，加入了1ul的loading buffer，混匀之后，点样孔加入10ul。
这样做确实是loading buffer 特别少，沉淀效果不好。因为我的loading buffer里，二甲苯青和溴酚蓝染料加的多，1ul就会导致胶在醋酸固定液固定的时候，颜色特别深，很难洗脱。
不知道您的loading buffer是怎么加的？加多少ul到PCR产物里？

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从事分生的药学生
33楼2015-09-30 12:40:01
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slina0925

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
29楼: Originally posted by 杜仲谷 at 2015-09-29 19:13:40
非常感谢，您能将生工的Loading Buffer产品货号告诉我一下吗？或者拍个图发上来行吗？
我的电泳缓冲液是新配置的1 X TBE，pH约8.0。...

B548641
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没有什么大不了的。。。
34楼2015-09-30 14:34:39
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郭盼盼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
33楼: Originally posted by 杜仲谷 at 2015-09-30 12:40:01
忘了问您，您加多少的loading buffer和多少ul的PCR产物混合在一起？
我是20ul的PCR产物，加入了1ul的loading buffer，混匀之后，点样孔加入10ul。
这样做确实是loading buffer 特别少，沉淀效果不好。因为我的load ...

我的PCR产物一般是4ul，loading buffer 是加6ul，你的loading buffer如果加太少了也就是PCR产物浓度太大是会造成样品不进入孔里面的现象的，你的染胶是怎么染得？方便说嘛
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坚持该坚持的
35楼2015-10-06 10:13:11
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杜仲谷

木虫 (职业作家)

金虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
35楼: Originally posted by 郭盼盼 at 2015-10-06 10:13:11
我的PCR产物一般是4ul，loading buffer 是加6ul，你的loading buffer如果加太少了也就是PCR产物浓度太大是会造成样品不进入孔里面的现象的，你的染胶是怎么染得？方便说嘛...

胶染的还可以，有空我给您上个图
聚丙烯酰胺凝胶电泳灌胶技巧



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从事分生的药学生
36楼2015-10-06 12:48:36
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凡人凡语1

新虫 (小有名气)
戴上防毒面具做了上百板，活下来了。

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37楼2015-10-06 13:03:53
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zyn19931211

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lf8306887 at 2015-09-25 14:53:04
这方面哥是绝对的权威，这个胶是用来做变性胶的，用于SSR分子标记，这个哥哥以前做博士做了三年，每天8块胶，每个胶板单次上样64个左右，SSR标记较集中的引物，可以间隔15分钟进行二次上样，这样每一块胶能跑128个样 ...

求大神联系方式啊

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38楼2015-10-06 17:51:03
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

好久不见鳄鱼齿，原来这个东西还没有完全绝种。
我只处理过20X40cm，0.4mm，我用20%的，气泡从来不是问题，就怕跑了一半胶凝了
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39楼2015-10-06 18:46:00
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郭盼盼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
36楼: Originally posted by 杜仲谷 at 2015-10-06 12:48:36
胶染的还可以，有空我给您上个图

...

看的不是特别清楚，我染胶时不固定，直接氧化和显影，结果还行
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40楼2015-10-08 08:32:35
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