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slina0925

铁虫 (初入文坛)

[求助] 聚丙烯酰胺凝胶电泳灌胶技巧 已有12人参与

亲爱的们，帮帮我吧，现在刚开始学习变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，但在刚开始灌胶就出了问题，总是有气泡。不知道是哪里出了问题？求助啊，谢谢。不胜感激！

聚丙烯酰胺凝胶电泳灌胶技巧
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没有什么大不了的。。。
1楼 2015-09-22 16:47:42
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杜仲谷

木虫 (职业作家)

金虫
引用回帖:
30楼: Originally posted by 郭盼盼 at 2015-09-30 09:35:21
我做的变性胶loading buffer 配方是甲酰胺95ml ， 10mmol 的EDTA（PH8.0) 2ml， 二甲苯氰0.09g，溴酚蓝0.09g，加水至100ml, 效果还不错，没有出现过一次你说的那样飘样的情况，你可以参考一下...

忘了问您，您加多少的loading buffer和多少ul的PCR产物混合在一起？
我是20ul的PCR产物，加入了1ul的loading buffer，混匀之后，点样孔加入10ul。
这样做确实是loading buffer 特别少，沉淀效果不好。因为我的loading buffer里，二甲苯青和溴酚蓝染料加的多，1ul就会导致胶在醋酸固定液固定的时候，颜色特别深，很难洗脱。
不知道您的loading buffer是怎么加的？加多少ul到PCR产物里？

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从事分生的药学生
33楼2015-09-30 12:40:01
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一句话，练习的不够呗，功夫出自有心人

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2楼2015-09-22 20:02:29
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小小鸟fq

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-09-22 22:17:20
楼主是指做蛋白质免疫印迹吗？我最近在做这个，几乎没有出现过气泡，希望能和你分享我的方法。用枪头灌胶（分离胶）时候沿着板的一端缓慢注入，尽量不要打进去太多气泡，有些小气泡时也不太要紧，胶板垂直放置时一般会自动浮上来，灌胶结束后可以立刻加异丙醇（ddH2O也可以）封闭压线，这样也能逼出气泡，而且分离胶平面也会比较平直。之后就不要碰胶板了，现在室温下大概20~30min分离胶就凝固了，倒掉异丙醇并倒置控干，然后再配置浓缩胶，也是沿一侧缓缓加入，加到溢出为止，将事先准备好的上样梳迅速插入，注意梳子应平直，等待自然凝固，再小心拔出梳子。说了这么多，注意事项有二：1.板架要放在水平桌面上，加样至凝胶过程不要随意挪动；2.灌入分离胶后加入异丙醇压线，基本上不会出现气泡。祝你好运!
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3楼2015-09-22 20:25:56
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jjxyygx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
熟能生巧，做多了就会。

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4楼2015-09-23 00:43:50
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