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keyth

铜虫 (初入文坛)

[求助] 请大家看看这个SDS-PAGE的胶浓度是否合适? 已有2人参与

样品是一种植物蛋白,分离胶浓度为12%,最右边为低分子量marker,分子量从15kDa-99kDa。左边都是样品。前沿一排的颜色好蓝,我怀疑不是我的样品杨塞,而是溴酚蓝的颜色。恳请各位老师帮我鉴定一下是否是胶浓度不合适或是其他原因
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【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
keyth: 金币+25, ★有帮助 2015-09-09 15:28:33
keyth: 金币+25, ★有帮助 2015-09-09 15:29:41
没看到图
据描述应该不是胶的问题。
染色液,海有脱色是否彻底。
请参考:电泳相关溶液的配置:

1、30%丙稀酰胺混合溶液(100ml):称取29g丙稀酰胺和1g bis丙稀酰胺,用水溶解定容到100ml,过滤,4摄氏度保存一个月。

2、 5×SDS电极缓冲液:称取Tris base15.1g,甘氨酸94.g,SDS 5.g加dH2O定容至1000ml。

3、2×样品缓冲液(10ml):甘油2ml,溴酚蓝0.0202g,1MTris·Cl(pH6.8)1ml巯基乙醇0.14ml,10%SDS 4ml。

4、染色液的配制(1000ml):

  用量筒分别量取250ml甲醇或者乙醇、80ml乙酸;在电子天平上称取0.125%考马斯亮蓝R250 1.25g,再将其一一加到1000ml锥形瓶中,用蒸馏水加以补足至1000ml。加入的先后顺序为:考马斯亮蓝R250,甲醇或者乙醇,蒸馏水,乙酸。充分混匀后进行过滤,收集滤液备用。当过滤速度变慢时要更换滤纸,快速过滤完,不可隔夜以免影响染色效果。

5、脱色液(1000ml):

   用量筒分别量取250ml甲醇或者乙醇、80ml乙酸、670ml蒸馏水加入烧杯中,待溶液混和均匀后加入盛脱色液的广口瓶;备用。
2楼2015-09-07 10:50:05
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keyth

铜虫 (初入文坛)

http://pan.baidu.com/s/1hqk2ndE
图片一直上传不了最后帖子都不能编辑了。。。电泳图片上传到网盘里了,麻烦您点击链接下载一下吧。。。
3楼2015-09-07 11:30:36
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不是胶的问题,应该是电泳缓冲液的问题,也有可能是跑电泳时条件不对
医学&统计学
4楼2015-09-08 09:40:26
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keyth

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 董博士 at 2015-09-08 09:40:26
不是胶的问题,应该是电泳缓冲液的问题,也有可能是跑电泳时条件不对

电泳缓冲液是按照14.4g甘氨酸,3g Tris,1g SDS定容至1000mL这样配制的。电泳条件是浓缩胶恒压100V,分离胶120V,起始电流50mA左右,电泳结束后大概会降到30mA。请问这样有什么问题吗?
5楼2015-09-08 16:57:58
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