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小李爱学习

铜虫 (正式写手)

[求助] 酶蛋白用DSC测定变性温度,没有出峰,求大神帮助。已有1人参与

各位大神求帮助:
  我从芒果中分离出了蔗糖水解酶,想研究这种酶的变性温度。
      (1) 我用TA-Q10 DSC仪器分析的,我是用液体盘,每个盘加的7 ul酶液(酶液的浓度可以做到SDS电泳后,考马斯亮蓝染色),每个样品盘温度从30 ℃升到100 ℃,温度速度1 ℃/min。
      (2)按理说蛋白应该在70-80度的时候变性有吸收峰的,但是我的DSC曲线却是平直的一条直线。
      (3)我怀疑是我的纯酶液样品蛋白浓度太低了,后来我又用纯化前的粗提液做了分析,也是平直的一条直线。
     求各位大神做过DSC的帮忙分析下原因,谢谢了。
        前一幅图我觉得是制样的问题,平直曲线请看WP_20141221_005.jpg这幅图,用手机拍的,请见谅。我第一次做DSC,可能有实验细节的问题,请大家提示,谢谢。

酶蛋白用DSC测定变性温度,没有出峰,求大神帮助。


酶蛋白用DSC测定变性温度,没有出峰,求大神帮助。-1
WP_20141221_005.jpg
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hhou221

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
小李爱学习: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢,我用Nano-DSC 做吧 2015-01-13 13:04:19
你可以尝试下把样品阴干了来做,影响DSC灵敏度有两个因素,一个是样品含量(建议你可以把样品阴干成膜后测试),还有一个是升温速率(速度快灵敏度高)。或者用微量的DSC来做,蛋白样品用普通DSC有时候不太好做。
2楼2015-01-13 11:33:31
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