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keyth

铜虫 (初入文坛)

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[求助] 请大家看看这个SDS-PAGE的胶浓度是否合适？已有2人参与

样品是一种植物蛋白，分离胶浓度为12%，最右边为低分子量marker，分子量从15kDa-99kDa。左边都是样品。前沿一排的颜色好蓝，我怀疑不是我的样品杨塞，而是溴酚蓝的颜色。恳请各位老师帮我鉴定一下是否是胶浓度不合适或是其他原因

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1楼2015-09-07 10:01:34

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hc-material

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【答案】应助回帖

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keyth: 金币+25, ★有帮助 2015-09-09 15:28:33
keyth: 金币+25, ★有帮助 2015-09-09 15:29:41

没看到图

据描述应该不是胶的问题。
染色液，海有脱色是否彻底。
请参考：电泳相关溶液的配置：

1、30%丙稀酰胺混合溶液（100ml）：称取29g丙稀酰胺和1g bis丙稀酰胺，用水溶解定容到100ml，过滤，4摄氏度保存一个月。

2、 5×SDS电极缓冲液：称取Tris base15.1g，甘氨酸94.g，SDS 5.g加dH2O定容至1000ml。

3、2×样品缓冲液（10ml）：甘油2ml，溴酚蓝0.0202g，1MTris·Cl（pH6.8）1ml巯基乙醇0.14ml，10%SDS 4ml。

4、染色液的配制（1000ml）:

用量筒分别量取250ml甲醇或者乙醇、80ml乙酸；在电子天平上称取0.125%考马斯亮蓝R250 1.25g，再将其一一加到1000ml锥形瓶中，用蒸馏水加以补足至1000ml。加入的先后顺序为：考马斯亮蓝R250，甲醇或者乙醇，蒸馏水，乙酸。充分混匀后进行过滤，收集滤液备用。当过滤速度变慢时要更换滤纸，快速过滤完，不可隔夜以免影响染色效果。

5、脱色液（1000ml）:

用量筒分别量取250ml甲醇或者乙醇、80ml乙酸、670ml蒸馏水加入烧杯中，待溶液混和均匀后加入盛脱色液的广口瓶；备用。