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david0308

木虫 (正式写手)

[求助] 糖基化蛋白纯化问题 已有1人参与

我最近准备用镍柱纯化一个多糖基化的蛋白,但是在洗脱的过程中发现糖基化降解的很厉害,请问有什么办法避免吗?请各位大侠帮忙!
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蛋白表达纯化与检测

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哈哈
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david0308

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2015-09-04 20:20:41
可以尝试在样品中加Triton X-100,焦磷酸钠(Na4P2O7·10H2O),β-磷酸甘油,EDTA,DTT.亮抑酶肽等抑制剂,防止蛋白降解。加入1%左右,可单独加入尝试,也可以复合加入尝试。在从层析的所有溶液中都加。可以试试,祝顺 ...

我觉得糖基化降解的主要原因是被还原,会不会是最后一步谷胱甘肽加的量过多导致的呢?
哈哈
3楼2015-09-05 11:17:30
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与,应助指数 +1
david0308: 金币+100, ★★★很有帮助 2015-09-05 11:16:15
可以尝试在样品中加Triton X-100,焦磷酸钠(Na4P2O7·10H2O),β-磷酸甘油,EDTA,DTT.亮抑酶肽等抑制剂,防止蛋白降解。加入1%左右,可单独加入尝试,也可以复合加入尝试。在从层析的所有溶液中都加。可以试试,祝顺利。
2楼2015-09-04 20:20:41
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by david0308 at 2015-09-05 11:17:30
我觉得糖基化降解的主要原因是被还原,会不会是最后一步谷胱甘肽加的量过多导致的呢?...

用镍柱纯化,加谷胱甘肽干啥。这个具体不知道,你可以尝试少加点试试。祝顺利。
4楼2015-09-05 12:06:17
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david0308

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by hc-material at 2015-09-05 12:06:17
用镍柱纯化,加谷胱甘肽干啥。这个具体不知道,你可以尝试少加点试试。祝顺利。...

谢谢啦!
哈哈
5楼2015-09-05 13:02:55
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