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donnafeng金虫 (小有名气)
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[求助]
疏水性蛋白表达纯化问题
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在做一个酶蛋白表达纯化 这个蛋白疏水性很强 活性形式可能是二聚体或者四聚体形式 在表达过程中非常容易生成包涵体 采用0.1mM IPTG 16度过夜诱导 有部分可溶性表达 表达量还是不高 过ni柱纯化以后 透析过程中非常容易产生沉淀 并且蛋白等电点预测在6.75 和ni柱操作时的的ph比较接近 看到万金油buffer的帖子后尝试用5%甘油保护透析时沉淀较少 但是甘油干扰酶活的测定 想请教 1 有没有别的跟甘油效果差不多的保护剂可以用 2 想尝试在培养基添加1%葡萄糖去除乳糖的影响 不知道葡萄糖要不要单独灭菌 还是和培养基一起灭 聚体怎么操作 |
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2楼2012-02-17 17:51:00
donnafeng
金虫 (小有名气)
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3楼2012-02-21 10:32:36