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david0308

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[求助] 糖基化蛋白纯化问题已有1人参与

我最近准备用镍柱纯化一个多糖基化的蛋白，但是在洗脱的过程中发现糖基化降解的很厉害，请问有什么办法避免吗？请各位大侠帮忙！

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蛋白表达纯化与检测

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哈哈

1楼2015-09-04 13:54:25

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hc-material

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【答案】应助回帖

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david0308: 金币+100, ★★★很有帮助 2015-09-05 11:16:15

可以尝试在样品中加Triton X-100，焦磷酸钠(Na4P2O7·10H2O),β-磷酸甘油，EDTA，DTT.亮抑酶肽等抑制剂，防止蛋白降解。加入1%左右，可单独加入尝试，也可以复合加入尝试。在从层析的所有溶液中都加。可以试试，祝顺利。

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2楼2015-09-04 20:20:41

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david0308

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引用回帖:

2楼: Originally posted by hc-material at 2015-09-04 20:20:41
可以尝试在样品中加Triton X-100，焦磷酸钠(Na4P2O7·10H2O),β-磷酸甘油，EDTA，DTT.亮抑酶肽等抑制剂，防止蛋白降解。加入1%左右，可单独加入尝试，也可以复合加入尝试。在从层析的所有溶液中都加。可以试试，祝顺 ...

我觉得糖基化降解的主要原因是被还原，会不会是最后一步谷胱甘肽加的量过多导致的呢？

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哈哈

3楼2015-09-05 11:17:30

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