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永远一片天

新虫 (正式写手)

[求助] 琼脂糖凝胶电泳问题 已有5人参与

电泳完毕后,取出凝胶,用含有0.5 ug/ml的溴化乙锭1×TAE溶液染色约20 min,再用清水漂洗10 min.
这一步具体怎么操作??直接配制EB缓冲液,然后在里面浸泡吗?可是并没有看到条带产生。。求助
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ged888

金虫 (正式写手)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-04 22:34:29
泡EB10分钟就够了,洗10秒也够了
然后需要在凝胶成像系统里看
肉眼肯定看不到
2楼2015-08-04 22:21:02
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guodonwang

铁虫 (初入文坛)

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我们是做琼脂糖胶时候加EB,直接加到胶里面,电泳15分钟(视片段大小及胶浓度而定),然后就照胶(UV下),就可以看出了,一班点样3-5ul,就行了。电泳后EB染色,容易导致DNA的扩散,照胶时,条带不清晰。
格物致知
3楼2015-08-05 00:55:05
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673643401

铁虫 (小有名气)

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我们也是配胶时直接把EB加到胶里面,胶里面加入一点EB就可以了。
4楼2015-08-05 08:57:41
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扬名声

新虫 (初入文坛)

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同上,把少量EB加到胶凝固前的液体里面
5楼2015-08-05 09:15:37
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蓝洋飘雪

木虫 (小有名气)

我们也是配胶时直接把EB加到胶里(EB在60-70℃有挥发毒性),跑完电泳后必须进行照胶才能看到有没有条带,肉眼是看不到的。
人生如茶,不会苦一辈子,但会苦一阵子!
6楼2015-08-05 13:20:06
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dingyi3363

铜虫 (初入文坛)

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我做的时候是先加EB然后再跑胶的
7楼2015-08-05 13:41:17
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狮子小恶

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 673643401 at 2015-08-05 08:57:41
我们也是配胶时直接把EB加到胶里面,胶里面加入一点EB就可以了。

你好,那是一般EB加多少啊?比如我配的是30mL的胶,应该加多少EB?谢谢啦

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2015-10-20 09:11:41
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