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rendan911117

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白电泳，求助 已有4人参与

蛋白marker用的是生工的BM201，说明书上有9条带，我一直只有4-5条带。15%的分离胶，90+130V。一个半小时左右。
因为没办法确定marker出现的五条带对应的分子量是多少，所以没办法继续实验。图片是我跑的蛋白胶，中间的五条带的是marker。
跑过蛋白电泳的同学请帮我看看是哪里出了问题？谢谢大家！

蛋白电泳，求助
IMG_1477__1.jpg
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1楼 2015-07-31 16:04:29
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这几条Marker应该是大的那几条。你这胶浓度确实是15%吗？觉得不太像啊
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2楼2015-07-31 16:44:03
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rendan911117

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a86052 at 2015-07-31 16:44:03
这几条Marker应该是大的那几条。你这胶浓度确实是15%吗？觉得不太像啊

我的配方是 低缓2.5ml 30%丙烯酰胺 5ml  水 2.5ml  过硫酸铵 50ul  TEMED 10ul     我想问一下 怎么才能看出这个胶不像是15%的胶  我是新接触这个实验  都不太懂
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3楼2015-07-31 18:35:58
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zhang001zh

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没拍全不能完全确定，你看看分离胶上层有没有蛋白没有跑下来 没有的话就按maker分子量从大到小对应就行

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2015-07-31 18:36:35
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a86052

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by rendan911117 at 2015-07-31 18:35:58
我的配方是 低缓2.5ml 30%丙烯酰胺 5ml  水 2.5ml  过硫酸铵 50ul  TEMED 10ul     我想问一下 怎么才能看出这个胶不像是15%的胶  我是新接触这个实验  都不太懂...

如果15的胶，按照你的电压和电泳时间，我觉得条带不会跑这么快
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5楼2015-08-01 20:46:54
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
胶图好模糊啊，你的定量是多少？
感觉你的表达蛋白的上样量太少，或者电泳时候loading buffer不行，导致蛋白跑了
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
6楼2015-08-03 10:06:52
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rendan911117

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-08-03 10:06:52
胶图好模糊啊，你的定量是多少？
感觉你的表达蛋白的上样量太少，或者电泳时候loading buffer不行，导致蛋白跑了

我在每个泳道加了12ul。  loading buffer是一直在用的  那我重新配一下。蛋白跑了  marker也会跟着跑出去是吗？
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7楼2015-08-04 15:09:00
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rendan911117

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhang001zh at 2015-07-31 18:36:35
没拍全不能完全确定，你看看分离胶上层有没有蛋白没有跑下来 没有的话就按maker分子量从大到小对应就行

上面的都跑下来了  这个应该是从大到小的了…
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8楼2015-08-04 15:09:46
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rendan911117

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by a86052 at 2015-08-01 20:46:54
如果15的胶，按照你的电压和电泳时间，我觉得条带不会跑这么快...

好的 那我再改一下胶的配方
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9楼2015-08-04 15:10:24
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douyagreen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

同认为应该注意一下胶浓度，另外，一般跑蛋白胶，溴酚蓝最好不要跑出去，其所指示的位置大约10kDa左右，利于观察。


by:我爱Bio网——生物工程与新医药研发服务平台
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10楼2015-08-05 12:59:09
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