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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 用流式细胞仪测定细菌数量时的染色问题。
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小木棉要努力

木虫 (正式写手)

[求助] 用流式细胞仪测定细菌数量时的染色问题。 已有1人参与

请教各位大侠，用流式细胞仪测定细菌数目、体积时可以用DAPI染色吗？按理能染上色的染料都可以，可为什么身边的同学或文章里大部分都是用Sybr green 1染色呢？可以用DAPI吗？请教请教，稍急！
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1楼 2015-07-12 16:30:07
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小木棉要努力: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2015-07-12 21:45:11
一般细菌不用dapi，dapi是用来染细胞核比较多。而sybr或者syto是一种DNA探针，可以稳定和DNA结合利于定位和分选。dapi一般都要在紫外分段鉴定，好像流式细胞仪紫外不太用吧。反正我没遇到过用紫外波段的。

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2楼2015-07-12 18:27:20
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小木棉要努力

木虫 (正式写手)
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2楼: Originally posted by snoopytbw at 2015-07-12 18:27:20
一般细菌不用dapi，dapi是用来染细胞核比较多。而sybr或者syto是一种DNA探针，可以稳定和DNA结合利于定位和分选。dapi一般都要在紫外分段鉴定，好像流式细胞仪紫外不太用吧。反正我没遇到过用紫外波段的。
...

那流式细胞仪用来测定细菌的数量到底准不准呢？有人说准有人说不准，不好拿捏啊，我之前有用DAPI染色荧光计数，按理那是比较靠谱的方法，但就是效率比较低，数起来费时费力。
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3楼2015-07-12 20:58:29
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小木棉要努力 at 2015-07-12 20:58:29
那流式细胞仪用来测定细菌的数量到底准不准呢？有人说准有人说不准，不好拿捏啊，我之前有用DAPI染色荧光计数，按理那是比较靠谱的方法，但就是效率比较低，数起来费时费力。...

细菌计数越简单越准确，又荧光又流式的，太麻烦还不准。推荐你用计数板吧。如果溶液澄清可以用od值同步验证。流式做细菌要放磁珠的，每个磁珠吸附量是个范围。。。。你懂的，除非是那种带pcr扩增片段的磁珠是可以定量的，但是宰你没商量的贵啊。是根据你要测的菌种，定制滴，没必要。

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小木棉要努力
4楼2015-07-12 21:19:56
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小木棉要努力

木虫 (正式写手)
送红花一朵
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4楼: Originally posted by snoopytbw at 2015-07-12 21:19:56
细菌计数越简单越准确，又荧光又流式的，太麻烦还不准。推荐你用计数板吧。如果溶液澄清可以用od值同步验证。流式做细菌要放磁珠的，每个磁珠吸附量是个范围。。。。你懂的，除非是那种带pcr扩增片段的磁珠是可以定 ...

非常感谢你！你的回答对我很有帮助，谢谢！
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5楼2015-07-12 21:44:55
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小木棉要努力

木虫 (正式写手)
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4楼: Originally posted by snoopytbw at 2015-07-12 21:19:56
细菌计数越简单越准确，又荧光又流式的，太麻烦还不准。推荐你用计数板吧。如果溶液澄清可以用od值同步验证。流式做细菌要放磁珠的，每个磁珠吸附量是个范围。。。。你懂的，除非是那种带pcr扩增片段的磁珠是可以定 ...

顺便问一下，能否告诉我用计数板的简便流程？因为我看文献里很少提及计数板法，一般都是DAPI和流式。
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6楼2015-07-12 21:46:33
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snoopytbw

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6楼: Originally posted by 小木棉要努力 at 2015-07-12 21:46:33
顺便问一下，能否告诉我用计数板的简便流程？因为我看文献里很少提及计数板法，一般都是DAPI和流式。...

http://wenku.baidu.com/link?url= ... SDC7Rin5Qjlrp31eJZ7
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7楼2015-07-13 08:48:41
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snoopytbw

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7楼: Originally posted by snoopytbw at 2015-07-13 08:48:41
http://wenku.baidu.com/link?url=GPrDw3Zzx2fUzry5bEy_KpxaquWls-NVLjt913T9UkF_IfMVZfsNy_5SHSX9TnawnfgVE6NlRG3X0PXYd-bbZAHDSDC7Rin5Qjlrp31eJZ7...

大概1500左右一块，进口的比较准
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8楼2015-07-13 08:49:10
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小木棉要努力

木虫 (正式写手)
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8楼: Originally posted by snoopytbw at 2015-07-13 08:49:10
大概1500左右一块，进口的比较准...

好的，谢谢！
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9楼2015-07-13 14:50:46
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