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鹿鹿_1130

铁虫 (正式写手)

[求助] 药品微生物 菌液浓度

大家好,我目前从事药品微生物检测工作,许多药品需要验证,在制备菌液浓度时,怎么能保证每次的菌液浓度一致,或者说每次能达到有效值 在50~100cfu/ml之间?
目前我们在用比浊管,这个是用眼睛观察,看浓度是否一致,这样的办法太主观,不确定性因素太多,不知道还有别的方法没,或者别的仪器,有能准确测定的?
请大家各抒己见,共同学习!谢谢!
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bikexmx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励新虫应助! 2013-12-03 22:13:19
可以做细菌生长的标准曲线,利用平板计数法和OD值测定法结合起来,这样每一个细菌浓度对应相应的OD值,下次用的时候只要测OD值就可以了
前方总有更多挑战,战胜恐惧,勇往向前,加油~~~~
2楼2013-12-03 16:55:41
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orangeleaf

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 鹿鹿_1130 at 2013-12-04 08:32:52
那我怎么确定菌的各吸收峰值啊?
大肠 金葡 枯草 白念 铜绿 黑曲霉?...

细菌,OD600下生长标准曲线都做下;
黑曲霉(菌丝,菌球)测OD不准,可用菌丝体干重测生长标准曲线(培养基内无不溶大颗粒)。
工业酶-T180;AU-400FLD;B85vanguard;E3-1280v3;NH-D9L;8GBx2;R7-250A-ZLH4;Black500GB;EA191M;SK-8115;M111s
4楼2013-12-04 09:10:40
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orangeleaf

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 鹿鹿_1130 at 2013-12-04 14:16:36
哦 也就是不管啥菌 只要是细菌都是OD600?
再有 我做生长曲线 是不是需要摇瓶啊?...

恩,不管啥菌 只要是细菌都可以是OD600(当然其他的比如OD570等也可以用)。
最常用用摇瓶做(大量的用发酵罐,小量的用试管,或其他容器都可以的)
工业酶-T180;AU-400FLD;B85vanguard;E3-1280v3;NH-D9L;8GBx2;R7-250A-ZLH4;Black500GB;EA191M;SK-8115;M111s
6楼2013-12-04 14:54:39
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
以标准曲线为准,不过标准曲线的线性范围比较窄,一般OD600为1-3作用比较好,反正是范围不能太大。

可以用10倍稀释平板接种法确定OD值与细菌浓度之间的关系。

另外还有经验值,如大肠杆菌OD600=1时,对应的浓度为10E9CFU/mL
环境卫生、微生物学、卫生应急
8楼2013-12-05 08:41:16
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orangeleaf

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 鹿鹿_1130 at 2013-12-05 08:39:04
我这边药厂是这样的,我首先是划出菌在小试管中,放培养箱中 培养不超过24小时,然后用接种环挑取一些菌,再用5ml盐水进行稀释,成为菌悬液,然后再一步一步稀释,从经验来看,金葡稀释到10的-6、-7即可(各种菌稀 ...

那就不用啥生长曲线了。
1.针对每一个菌,做一系列浓度梯度(10的-6、-7等,当然数据越多越好),每个浓度测下OD(浓度与OD曲线可做可不做)。
2.实际用的时候测OD代替比浊管肉眼对照浓度。
工业酶-T180;AU-400FLD;B85vanguard;E3-1280v3;NH-D9L;8GBx2;R7-250A-ZLH4;Black500GB;EA191M;SK-8115;M111s
9楼2013-12-05 09:05:28
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virty76

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有这样的仪器,流式细胞仪,
不过你工厂的办法其实也简单,接种环取菌量一般差不多,何况还做了两个稀释浓度,一般没问题了。
12楼2013-12-06 08:31:12
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普通回帖

鹿鹿_1130

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bikexmx at 2013-12-03 16:55:41
可以做细菌生长的标准曲线,利用平板计数法和OD值测定法结合起来,这样每一个细菌浓度对应相应的OD值,下次用的时候只要测OD值就可以了

那我怎么确定菌的各吸收峰值啊?
大肠 金葡 枯草 白念 铜绿 黑曲霉?
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3楼2013-12-04 08:32:52
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鹿鹿_1130

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by orangeleaf at 2013-12-04 09:10:40
细菌,OD600下生长标准曲线都做下;
黑曲霉(菌丝,菌球)测OD不准,可用菌丝体干重测生长标准曲线(培养基内无不溶大颗粒)。...

哦 也就是不管啥菌 只要是细菌都是OD600?
再有 我做生长曲线 是不是需要摇瓶啊?
做一个可以奋斗的人!
5楼2013-12-04 14:16:36
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鹿鹿_1130

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by orangeleaf at 2013-12-04 14:54:39
恩,不管啥菌 只要是细菌都可以是OD600(当然其他的比如OD570等也可以用)。
最常用用摇瓶做(大量的用发酵罐,小量的用试管,或其他容器都可以的)...

我这边药厂是这样的,我首先是划出菌在小试管中,放培养箱中 培养不超过24小时,然后用接种环挑取一些菌,再用5ml盐水进行稀释,成为菌悬液,然后再一步一步稀释,从经验来看,金葡稀释到10的-6、-7即可(各种菌稀释到不同稀释级别)。
问题就出来了,每次做原液,也就是菌悬液时,是用比浊管肉眼对照浓度,这样非常不准确,如果浓了,可能到10的-6、-7,菌液浓,菌数太多,不好计数;如果稀了,可能到10的-6、-7,菌液稀,菌数太少,误差大,不具代表性!所以需要怎样的仪器或者什么方法最好,合适我们这样的实验!
做一个可以奋斗的人!
7楼2013-12-05 08:39:04
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鹿鹿_1130

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by orangeleaf at 2013-12-05 09:05:28
那就不用啥生长曲线了。
1.针对每一个菌,做一系列浓度梯度(10的-6、-7等,当然数据越多越好),每个浓度测下OD(浓度与OD曲线可做可不做)。
2.实际用的时候测OD代替比浊管肉眼对照浓度。...

可能只能用这样的办法了 我合计有没有这样的仪器 一下就能测出来的!呵呵
做一个可以奋斗的人!
10楼2013-12-05 11:42:45
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