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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 药品微生物 菌液浓度
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鹿鹿_1130

铁虫 (正式写手)

[求助] 药品微生物 菌液浓度

大家好，我目前从事药品微生物检测工作，许多药品需要验证，在制备菌液浓度时，怎么能保证每次的菌液浓度一致，或者说每次能达到有效值 在50~100cfu/ml之间？
目前我们在用比浊管，这个是用眼睛观察，看浓度是否一致，这样的办法太主观，不确定性因素太多，不知道还有别的方法没，或者别的仪器，有能准确测定的？
请大家各抒己见，共同学习！谢谢！
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做一个可以奋斗的人！
1楼 2013-12-03 16:43:46
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

bikexmx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励新虫应助！ 2013-12-03 22:13:19
可以做细菌生长的标准曲线，利用平板计数法和OD值测定法结合起来，这样每一个细菌浓度对应相应的OD值，下次用的时候只要测OD值就可以了
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前方总有更多挑战，战胜恐惧，勇往向前，加油~~~~
2楼2013-12-03 16:55:41
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orangeleaf

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 鹿鹿_1130 at 2013-12-04 08:32:52
那我怎么确定菌的各吸收峰值啊？
大肠 金葡 枯草 白念 铜绿 黑曲霉？...

细菌，OD600下生长标准曲线都做下；
黑曲霉（菌丝，菌球）测OD不准，可用菌丝体干重测生长标准曲线（培养基内无不溶大颗粒）。
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工业酶-T180;AU-400FLD;B85vanguard;E3-1280v3;NH-D9L;8GBx2;R7-250A-ZLH4;Black500GB;EA191M;SK-8115;M111s
4楼2013-12-04 09:10:40
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orangeleaf

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 鹿鹿_1130 at 2013-12-04 14:16:36
哦 也就是不管啥菌 只要是细菌都是OD600？
再有 我做生长曲线 是不是需要摇瓶啊？...

恩，不管啥菌 只要是细菌都可以是OD600（当然其他的比如OD570等也可以用）。
最常用用摇瓶做（大量的用发酵罐，小量的用试管，或其他容器都可以的）
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工业酶-T180;AU-400FLD;B85vanguard;E3-1280v3;NH-D9L;8GBx2;R7-250A-ZLH4;Black500GB;EA191M;SK-8115;M111s
6楼2013-12-04 14:54:39
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
以标准曲线为准，不过标准曲线的线性范围比较窄，一般OD600为1-3作用比较好，反正是范围不能太大。

可以用10倍稀释平板接种法确定OD值与细菌浓度之间的关系。

另外还有经验值，如大肠杆菌OD600=1时，对应的浓度为10E9CFU/mL
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环境卫生、微生物学、卫生应急
8楼2013-12-05 08:41:16
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orangeleaf

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 鹿鹿_1130 at 2013-12-05 08:39:04
我这边药厂是这样的，我首先是划出菌在小试管中，放培养箱中 培养不超过24小时，然后用接种环挑取一些菌，再用5ml盐水进行稀释，成为菌悬液，然后再一步一步稀释，从经验来看，金葡稀释到10的-6、-7即可（各种菌稀 ...

那就不用啥生长曲线了。
1.针对每一个菌，做一系列浓度梯度(10的-6、-7等，当然数据越多越好)，每个浓度测下OD（浓度与OD曲线可做可不做）。
2.实际用的时候测OD代替比浊管肉眼对照浓度。
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工业酶-T180;AU-400FLD;B85vanguard;E3-1280v3;NH-D9L;8GBx2;R7-250A-ZLH4;Black500GB;EA191M;SK-8115;M111s
9楼2013-12-05 09:05:28
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virty76

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有这样的仪器，流式细胞仪，
不过你工厂的办法其实也简单，接种环取菌量一般差不多，何况还做了两个稀释浓度，一般没问题了。
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12楼2013-12-06 08:31:12
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普通回帖

鹿鹿_1130

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bikexmx at 2013-12-03 16:55:41
可以做细菌生长的标准曲线，利用平板计数法和OD值测定法结合起来，这样每一个细菌浓度对应相应的OD值，下次用的时候只要测OD值就可以了

那我怎么确定菌的各吸收峰值啊？
大肠 金葡 枯草 白念 铜绿 黑曲霉？
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做一个可以奋斗的人！
3楼2013-12-04 08:32:52
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鹿鹿_1130

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by orangeleaf at 2013-12-04 09:10:40
细菌，OD600下生长标准曲线都做下；
黑曲霉（菌丝，菌球）测OD不准，可用菌丝体干重测生长标准曲线（培养基内无不溶大颗粒）。...

哦 也就是不管啥菌 只要是细菌都是OD600？
再有 我做生长曲线 是不是需要摇瓶啊？
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5楼2013-12-04 14:16:36
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鹿鹿_1130

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by orangeleaf at 2013-12-04 14:54:39
恩，不管啥菌 只要是细菌都可以是OD600（当然其他的比如OD570等也可以用）。
最常用用摇瓶做（大量的用发酵罐，小量的用试管，或其他容器都可以的）...

我这边药厂是这样的，我首先是划出菌在小试管中，放培养箱中 培养不超过24小时，然后用接种环挑取一些菌，再用5ml盐水进行稀释，成为菌悬液，然后再一步一步稀释，从经验来看，金葡稀释到10的-6、-7即可（各种菌稀释到不同稀释级别）。
问题就出来了，每次做原液，也就是菌悬液时，是用比浊管肉眼对照浓度，这样非常不准确，如果浓了，可能到10的-6、-7，菌液浓，菌数太多，不好计数；如果稀了，可能到10的-6、-7，菌液稀，菌数太少，误差大，不具代表性！所以需要怎样的仪器或者什么方法最好，合适我们这样的实验！
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7楼2013-12-05 08:39:04
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鹿鹿_1130

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by orangeleaf at 2013-12-05 09:05:28
那就不用啥生长曲线了。
1.针对每一个菌，做一系列浓度梯度(10的-6、-7等，当然数据越多越好)，每个浓度测下OD（浓度与OD曲线可做可不做）。
2.实际用的时候测OD代替比浊管肉眼对照浓度。...

可能只能用这样的办法了 我合计有没有这样的仪器 一下就能测出来的！呵呵
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10楼2013-12-05 11:42:45
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