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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 感受态细胞制备
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xinyou519

新虫 (初入文坛)

[求助] 感受态细胞制备 已有4人参与

各位虫友，大家在制备感受态细胞的时候最后一步Cacl2和甘油是如何加的？我的做法是用100mmol的Cacl2溶解沉淀然后加入相同体积的30%甘油，这样制成的感受态细胞，甘油浓度最终是15%，但是Cacl2浓度却降到了50mmol，是不是浓度太低呢？大家在实验中是如何做的？
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1楼 2015-07-09 22:01:04
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-10 21:00:40
溶解沉淀？那还有感受态吗？我这边用50%甘油。用活力好的菌株，纯的试剂，这个效率就上去了

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2015-07-10 05:57:14
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jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-10 21:00:54
850ul 的Cacl和150 ul的甘油先混合，再重悬细胞沉淀。
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123456
3楼2015-07-10 08:32:58
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-07-10 21:01:06
我们实验室的方法是用2mL预冷的0.1mol/L的CaCl2 溶液，轻轻悬浮细胞，然后加2ml 50%的甘油，然后分装冻存就可以了，每次的效率都很好，但我们实验室的老板说感受态最好在一周之内用，过了一周效率就降低了
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医学&统计学
4楼2015-07-10 15:55:33
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wufeng1991

新虫 (小有名气)
要放-80

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2015-07-10 20:43:21
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ppppppppp

新虫 (小有名气)
直接配成0.1M的氯化钙甘油水溶液啊，然后灭菌。多方便啊。。。
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初来乍到，请多指教
6楼2015-07-10 23:15:11
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十比

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
混在一起或分别加都是可以的。
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7楼2015-07-11 08:53:25
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大别克

新虫 (初入文坛)
直接配点氯化钙甘油灭菌，使用前冰浴。纯度越高的试剂，做出来的效价越高，一般负八十度冰箱保存半年问题不大，前提是不要经常翻动，导致温差大
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8楼2017-08-11 10:52:04
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