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xinyou519

新虫 (初入文坛)

[求助] 感受态细胞制备已有4人参与

各位虫友,大家在制备感受态细胞的时候最后一步Cacl2和甘油是如何加的?我的做法是用100mmol的Cacl2溶解沉淀然后加入相同体积的30%甘油,这样制成的感受态细胞,甘油浓度最终是15%,但是Cacl2浓度却降到了50mmol,是不是浓度太低呢?大家在实验中是如何做的?
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大别克

新虫 (初入文坛)

直接配点氯化钙甘油灭菌,使用前冰浴。纯度越高的试剂,做出来的效价越高,一般负八十度冰箱保存半年问题不大,前提是不要经常翻动,导致温差大
8楼2017-08-11 10:52:04
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-10 21:00:40
溶解沉淀?那还有感受态吗?我这边用50%甘油。用活力好的菌株,纯的试剂,这个效率就上去了

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-07-10 05:57:14
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jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-10 21:00:54
850ul 的Cacl和150 ul的甘油先混合,再重悬细胞沉淀。
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3楼2015-07-10 08:32:58
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-07-10 21:01:06
我们实验室的方法是用2mL预冷的0.1mol/L的CaCl2 溶液,轻轻悬浮细胞,然后加2ml 50%的甘油,然后分装冻存就可以了,每次的效率都很好,但我们实验室的老板说感受态最好在一周之内用,过了一周效率就降低了
医学&统计学
4楼2015-07-10 15:55:33
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