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awaken2013

铜虫 (小有名气)

[求助] 密码子优化后,毕赤酵母表达活性低 已有2人参与

最近做毕赤酵母的表达,诱导96h 上清的活力很低。。
一开始以为是组氨酸纯化标签的影响,后来换了一下位置。发现筛选平板上的确是有活性。
但是转移到BMMY摇瓶(按照手册标准流程,也参考了同种蛋白表达的文献),蛋白有表达(SDS检测到了)但是活性依然很低。跟文献上的差个几百倍吧。。

后来一个问题一个问题的寻找,发现有没有可能是密码子优化后,反而表达量和活性都下降了?
由于新的基因合成还要等一段时间,上来问问各位虫友有没有类似的情况发生?
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smutao

禁虫 (著名写手)

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本帖内容被屏蔽

2楼2015-07-09 01:01:11
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awaken2013

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by smutao at 2015-07-09 01:01:11
确定一下密码子变了之后在你的生物体系里面还是不是同一个氨基酸?

完全一致,还测了序,太奇怪了,现在根本找不到原因。。
3楼2015-07-09 08:48:33
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Aaqqwwaqw

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
awaken2013: 金币+10, ★有帮助, 有可能..但是没有证据 2015-07-09 19:49:56
如果密码子优化之后,同一个组氨酸使用的都是同样的密码子,会不会增大该型tRNA的压力,反而不好?
4楼2015-07-09 08:55:13
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