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fengjunchen铜虫 (小有名气)
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[求助]
求帮忙分析土壤DNA提取后断裂的原因 已有1人参与
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研一新人，最近在练习从土壤中提取基因组DNA，使用的一种很粗犷的CTAB和SDS提取土壤DNA的方法。之前几次从10g地表土壤中提取DNA，结果都还好，跑胶看看主要在23Kb以上；昨天我尝试了一下把提取的体系放大到250g，结果跑出来胶看看，全都断裂弥散了。 回想这次和之前提取的不同之处，大概回想到这么几点不同，求有经验的师兄师姐们帮忙分析分析。 1、这几天下雨，取的土很湿，所以我60度烘干了大概一个小时。导师说这种高温没准会损害到DNA的完整性。 2、然后我顺便用研钵研磨了一下，不知是否会对DNA的完整性有影响？ 3、体系放大后，沉淀也多了很多，离心后75%乙醇清洗过程中，我用枪头将沉淀片捣碎，动作算是挺轻的。 4、跑胶之前，DNA溶液在4度冰箱里放置了大概20h，不知是否会降解？ 我传了一张跑胶的图片，三条涌道，分别是48Kb的λDNA，λ/HindIII Marker，提取的土壤DNA溶液。 到底是哪步出了问题导致DNA断裂弥散了呢？我很费解。  2015.6.26_副本.jpg |
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2楼2015-06-27 05:18:01
fengjunchen
铜虫 (小有名气)
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- 专业: 环境微生物学
3楼2015-06-27 16:00:22
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