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WB图老是跑不出来，条带一次比一次差肿么办？ 已有3人参与
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各位大神，小女子WB新手，做加药不同浓度后，对蛋白的影响，挑选了Bcl-2作为研究对象， 第一次做的时候，Bcl-2条带如图1，第二次如图2；第三次如图3；第四次如图4。——条带从最左边起往右数4个，对应加药浓度依次增加。 几次操作几乎没变化，第一次做配的一抗，二抗几天前配的，之后用的都是回收的一抗、二抗。12%的胶是买的。 疑惑的是，为啥第一次跑出条带，第二、三、四次都重复不出来呢？就算蛋白没有变化，可是条带不清晰是什么鬼啊？？？ 最近流年不利，做什么实验都做不出结果，每次面对老板都无地自容了，求版上大神帮忙解惑  新虫一只，木有多少金币，见谅  IMG_20150619_212025.jpg |
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【答案】应助回帖
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菇凉，我对Bcl-2药代不是很了解，不过从你的实验经过上，我发现几个问题，值得你改变一下： （吐槽一下：你一抗，二抗回收他们干嘛？还反复用，真是抠门的。） １.你每反应一次他们就结合到你的膜上一些，那么你回收的一抗二抗就越少。从结果来看第一次结合了相当大一部分一抗，后面反应时一抗不足，因此不管你怎么加大给药浓度什么的，没有足够的一抗结合药物和二抗，自然越来越弱，这是一个层递关系。 ２.一抗二抗不管你是用什么方法回收的，都存在污染长菌问题，因此会造成膜上斑斑点点，背景等问题。 建议：一抗、二抗按照你第一次的浓度，计算好每次用量不浪费，每次现配现用。 |
2楼2015-06-23 23:15:40
3楼2015-06-24 20:58:28
4楼2015-06-24 23:03:01
zhysyz2008
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