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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 实验技术 » 求助！植物组化问题
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cyymm

木虫 (初入文坛)

[求助] 求助！植物组化问题 已有2人参与

请问大家我现在做植物组化，能切出来，但微波修复时脱片很严重 ，这该怎么办呢？
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1楼 2015-06-16 15:19:54
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

q317476148

铁杆木虫 (著名写手)

喵星人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把玻片用多聚赖氨酸处理。
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2楼2015-06-16 17:02:44
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普通回帖

银绳

木虫 (著名写手)

植物菜鸟
引用回帖:
2楼: Originally posted by q317476148 at 2015-06-16 17:02:44
把玻片用多聚赖氨酸处理。

啥时候教教俺，想学习下
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爱好植物，但是是一只菜鸟！
3楼2015-06-16 18:16:31
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mutant

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cyymm: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2015-06-23 10:31:16
切片不要太厚；主要原因就是建议你使用多聚赖氨酸处理过的防脱载玻片，组化专用的，其次就是烤片的时候，建议在60度作用烤一个小时左右，这样材料在切片上会粘的更牢固。
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4楼2015-06-16 19:53:51
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cyymm

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mutant at 2015-06-16 19:53:51
切片不要太厚；主要原因就是建议你使用多聚赖氨酸处理过的防脱载玻片，组化专用的，其次就是烤片的时候，建议在60度作用烤一个小时左右，这样材料在切片上会粘的更牢固。

谢谢回复
再请教下我做的是玉米粉的组化，一般切多少厚度可以呢？
我现在切的是有点厚，9、10um了，但是是包埋条件优化过了切出来的
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5楼2015-06-17 08:36:26
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cyymm

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by q317476148 at 2015-06-16 17:02:44
把玻片用多聚赖氨酸处理。

感谢版主！
我们实验室是用APES处理的，没用过多聚赖氨酸，之前做的动物的片子都很好。是植物的和动物的不一样吗？
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6楼2015-06-17 08:37:36
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mutant

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cyymm at 2015-06-17 08:36:26
谢谢回复
再请教下我做的是玉米粉的组化，一般切多少厚度可以呢？
我现在切的是有点厚，9、10um了，但是是包埋条件优化过了切出来的...

9,10um 差不多了，我当时做的种子切片，也是很硬的，另外一点你材料石蜡包埋的效果如何？切片时有没有破裂什么的，假如这种情况都没有的话，那就是组化粘片的问题了，还有你微博修复时也不能太剧烈了，不然肯定也会掉片，

采用微波修复法，将组织玻片放入耐高温载玻架上，然后放入柠檬酸盐抗原修复液中，微波加热修复，温度维持在95℃左右，6min后观察修复液是否减少，如有减少，用蒸馏水补足到原来体积，继续加热5min。冷却至室温后，用PBST(pH7.4)冲洗3次，每次5min。


这是我硕士论文里组化微博修复的方法，当时实验结果还算可以吧，所以希望对你有用，可以借鉴下！
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7楼2015-06-29 11:08:14
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mutant

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cyymm at 2015-06-17 08:36:26
谢谢回复
再请教下我做的是玉米粉的组化，一般切多少厚度可以呢？
我现在切的是有点厚，9、10um了，但是是包埋条件优化过了切出来的...

9,10um 差不多了，我当时做的种子切片，也是很硬的，另外一点你材料石蜡包埋的效果如何？切片时有没有破裂什么的，假如这种情况都没有的话，那就是组化粘片的问题了，还有你微博修复时也不能太剧烈了，不然肯定也会掉片，

采用微波修复法，将组织玻片放入耐高温载玻架上，然后放入柠檬酸盐抗原修复液中，微波加热修复，温度维持在95℃左右，6min后观察修复液是否减少，如有减少，用蒸馏水补足到原来体积，继续加热5min。冷却至室温后，用PBST(pH7.4)冲洗3次，每次5min。


这是我硕士论文里组化微博修复的方法，当时实验结果还算可以吧，所以希望对你有用，可以借鉴下！
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8楼2015-06-29 11:08:46
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mutant

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cyymm at 2015-06-17 08:37:36
感谢版主！
我们实验室是用APES处理的，没用过多聚赖氨酸，之前做的动物的片子都很好。是植物的和动物的不一样吗？...

时间长了都忘了APES具体的原理了，用它处理过的，应该可以吧，总比没有经过任何处理的强，你先试试
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9楼2015-06-29 11:12:32
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cyymm

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by mutant at 2015-06-29 11:08:46
9,10um 差不多了，我当时做的种子切片，也是很硬的，另外一点你材料石蜡包埋的效果如何？切片时有没有破裂什么的，假如这种情况都没有的话，那就是组化粘片的问题了，还有你微博修复时也不能太剧烈了，不然肯定也会 ...

包埋切片都没问题
动物组织切片的微波修复通常是煮沸，高火4min+冷却1min（补液） ，重复4次，都没问题
植物的我修改了，先煮沸柠檬酸修复液，再把片子浸没，再中火4min，放在微波炉里闷10min，就这样还是有脱片的
另外我做的是玉米粉的，本身就是碎的。
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10楼2015-06-29 17:44:43
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