| 查看: 3214 | 回复: 12 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
WB无目的条带，actin是正常的。 已有7人参与
|
|||
|
我想要的目的蛋白是鸟氨酸脱羧酶（ODC，51 kDa，位于胞浆），我搜了相关文献，该蛋白做WB并没有对于还原或非还原，变性或非变性的特殊要求，其中有一篇的各方面操作写的非常详细，也没有考虑变性或者还原的问题。故，我的实验步骤都是很常规的方法。尝试了两家公司的一抗，两种细胞株HepG2和A549（说明书上条带很亮），上样量50ug。 我每次实验的结果都可以用下边的图来表示，即β-actin很清晰，几乎背景颜色，目的蛋白部位无任何条带。 第一家公司的一抗已经退货，第二家是Abcam的，已经交了投诉表。 提取蛋白：买的全蛋白提取试剂盒（含有裂解液，各种酶抑制剂等），按照说明书做的； 蛋白电泳：网上搜的最常规的配方（有SDS），步骤； 转膜：由Marker可以看出，非常清晰； 封闭：5% 脱脂奶粉，1h，室温； 一抗：兔源，5% 脱脂奶粉溶液，12h，4℃； 二抗：鼠抗兔，TBST溶液，1h，室温； 显影：ECL，天能的仪器，最大曝光5min。 综上，无目的条带的原因，除了一抗有问题，是否还有其他可以改进的地方？谢谢各位了，这实验我从5.1放假前的周末开始做，直到现在，尝试了各种条件  。 WB图片-可见光下与ECL试剂显色后 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 生物学习 |
» 猜你喜欢
综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？
已经有13人回复
-
2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B?
已经有4人回复
-
应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键
已经有29人回复
-
奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样
已经有9人回复
-
是这周出结果还是下周出结果？
已经有3人回复
-
小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊
已经有9人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有4人回复
-
帮忙看看fileCode
已经有13人回复
-
为什么网上很多人说本周 12号出结果
已经有7人回复
-
读博的好处
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于原核表达后，WB条带不单一的问题。请大神帮忙！
已经有5人回复
- SDS-PAGE后，考染有条带，WB后检测不到目的蛋白。
已经有7人回复
- Western曝光后无条带，跪求指教！！！
已经有45人回复
- 170kDa膜蛋白MRP1跑WB遇到问题
已经有39人回复
- WB扫膜出现背景深且有些条带呈白亮状是怎么回事？
已经有8人回复
- wb看到荧光，但压片显影定影后x胶片上没有条带，麻烦各位大侠指点指点
已经有8人回复
- WB结果杂不出目的条带，只有特别亮的非特异性条带，求高手解释原因
已经有10人回复
- WB条带总是不太整齐
已经有6人回复
- WB结果分析时，为什么背景灰度值要比目的条带高呢？
已经有9人回复
- WB条带周围黑黑的一团！！！！！
已经有12人回复
- WB条带全出来了· ----各种条带··求分析
已经有12人回复
- western blot 第一次曝光有条带，而且浓厚，第二次就没有了。。。
已经有13人回复
- 提取RNA后，反转录后用β-actinpcr很多条带
已经有20人回复
- wb，条带异常，拖尾，弥散。
已经有8人回复
- 【求助/交流】wb时β-actin加完发光液不发光？
已经有4人回复
- 【求助/交流】做培养细胞的RT-PCR，β-actin内参出现两个条带，求原因。
已经有10人回复
- 【求助/交流】WB显影后最后一个条带出现双条带？
已经有4人回复
314300420
捐助贵宾 (著名写手)
- BioEPI: 3
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 2193.1
- 散金: 2458
- 红花: 17
- 帖子: 1447
- 在线: 511.5小时
- 虫号: 851254
- 注册: 2009-09-18
- 性别: GG
- 专业: 抗体工程学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
youlinglyw: 金币+5, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩 2015-08-18 20:17:24
youlinglyw: 金币+5, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩 2015-08-18 20:17:24
|
http://www.abcam.com/ornithine-d ... r5724-ab126590.html abcam这个货号吧，看起来这个抗体还是比较靠谱的，建议提高一抗浓度试试 |
6楼2015-07-30 23:07:18
董博士
金虫 (正式写手)
- 应助: 155 (高中生)
- 金币: 3131.1
- 红花: 24
- 帖子: 312
- 在线: 96.2小时
- 虫号: 3524307
- 注册: 2014-11-07
- 专业: 医学图像数据处理与分析
2楼2015-06-12 16:58:22
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amido: 金币+20, ★★★很有帮助, 你好，我的一抗浓度很高，稀释倍数说明书上建议量1/1000~1/10000，我按1/1000做的。至于曝光时间，我尝试过，时间太长就变淡了，目前最长试过刚加完ECL，曝光5min。我没用过暗室和胶片，是否用了暗室和胶片曝光可以大大延长？ 2015-06-12 22:26:38
感谢参与，应助指数 +1
amido: 金币+20, ★★★很有帮助, 你好，我的一抗浓度很高，稀释倍数说明书上建议量1/1000~1/10000，我按1/1000做的。至于曝光时间，我尝试过，时间太长就变淡了，目前最长试过刚加完ECL，曝光5min。我没用过暗室和胶片，是否用了暗室和胶片曝光可以大大延长？ 2015-06-12 22:26:38
|
你可以尝试增加曝光时间，或者减少抗体稀释倍数，有可能这种蛋白含量较少，不好检测。 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
3楼2015-06-12 22:17:14
4楼2015-06-12 22:57:20
