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luyo_wait

金虫 (初入文坛)

[求助] 大神帮我看看这样的RNA是不是能用来荧光定量? 已有2人参与

请问:左边的8条泳道为根,右边的8条为叶片,是不是右边的叶片已经降解了?这种结果还能不能用来qRT-PCR?什么只有叶片降解了,而根没有降解?

操作过程中几个可能有问题的地方:

1.提取完成后用全式金的RNA溶解液溶解后我在常温下(20℃)放置了一个小时,不会这段时间分解了吧?
2.跑胶的时候用了1.5%的琼脂糖,但配置1xTAE的时候我是拿实验室纯水直接配置的,不会是这个过程产生的影响?
3.叶中提取出的RNA量要明显多于根,是不是多了反而跑不开?
3.顺便请教下提取好的RNA(用溶解液溶解后)如何保存最好?大概一周后要用。

大神帮我看看这样的RNA是不是能用来荧光定量?
NML2015-05-06 22 时 14 分.jpg
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-05-08 13:11:00
luyo_wait: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-05-12 09:15:21
叶片降解。RNA溶解后,室温放置易降解,最好放到冰上。长期保存要超低温。原则上这个过程,包括电泳,都是需要用RNase-free,但一般电泳液,只要换新就好,电泳时间尽量短,电压尽量低(110 V-130 V,7-10 min就好)。浓度和质量的量化,可以用仪器测定(分光光度计或Nanodrop)。
4楼2015-05-08 11:21:10
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小小逍遥人

金虫 (正式写手)

张斌猪

可以Qpcr定量,直接放-20即可
生命还需要奇迹来衬托
2楼2015-05-08 10:57:37
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-05-08 13:10:51
多了没事,要反转录的吗?放负80度。
采菊东篱下,悠然见南山。
3楼2015-05-08 11:03:50
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