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玲珑琉璃

铜虫 (正式写手)

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专业: 基因表达调控与表观遗传学

[求助] 有高手了解文库构建吗？已有1人参与

需要构建的是基因组文库，有问题想请教一下。
目前想到的是，1. 构建文库需要的基因组含量，大概需要多少ng？
2. 具体操作中，基因组片段要和载体相连接，文科构建的连接和一般构建的连接一样吗？一般的连接体系是10ul，分别加片段、载体、buffer和酶。构建文库时体积需要扩大多少倍呢？
3. 评价效价时要计算文库滴度和获得的克隆数，这部分没大看懂。这两个是否是一个意思，根据文库滴度来推算获得的总的克隆数，而不是一个一个得去计数单克隆。而且实验方法中经常提到做梯度稀释，这个不大明白，一般的文库构建不需要稀释的。构建文库涂板时都需要稀释才能涂板还是每个每个稀释的浓度分别涂板。
希望热心的高手能解答一下，先谢谢啦！

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一个不成熟男人的标志是他愿意为某种事业英勇地死去，一个成熟男人的标志是他愿意为某种事业卑贱地活着。━━━塞林格

1楼 2015-04-30 08:56:55

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

Longnil

新虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

6楼: Originally posted by 玲珑琉璃 at 2015-06-15 09:24:18
我对您的回复是这样理解的，您看对吗。
1.这80ng全部进行酶切并回收吧，先只用一个20ul 的体系进行连接；
2.取出2ul 和20ul 的连接产物涂布平板，推断出需要涂布多少转化液；
3.根据计算得到的构建文库需要多少 ...

你理解的完全正确，请问你现在做的怎么样了？