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玲珑琉璃铜虫 (正式写手)
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有高手了解文库构建吗？ 已有1人参与
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需要构建的是基因组文库，有问题想请教一下。 目前想到的是，1. 构建文库需要的基因组含量，大概需要多少ng？ 2. 具体操作中，基因组片段要和载体相连接，文科构建的连接和一般构建的连接一样吗？一般的连接体系是10ul，分别加片段、载体、buffer和酶。构建文库时体积需要扩大多少倍呢？ 3. 评价效价时要计算文库滴度和获得的克隆数，这部分没大看懂。这两个是否是一个意思，根据文库滴度来推算获得的总的克隆数，而不是一个一个得去计数单克隆。而且实验方法中经常提到做梯度稀释，这个不大明白，一般的文库构建不需要稀释的。构建文库涂板时都需要稀释才能涂板还是每个每个稀释的浓度分别涂板。 希望热心的高手能解答一下，先谢谢啦！ |
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玲珑琉璃: 金币+50, ★★★★★最佳答案, 清晰！谢谢！ 2015-06-15 09:17:09
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楼主你好，我现在也在建库 1. 构建文库需要的基因组含量，需要80ng 2. 基因组酶切后与载体进行连接（20微升体系）： 15.5微升DNA、2微升buffer、1.5微升PUC118 3.这一步我们是预先涂两个浓度的平板2微升和20微升，37℃培养12小时后根据平板上菌的生长量来确定具体涂布多少转化液。(每个板100-200个菌最适) 有什么问题或好的想法希望我们继续交流，祝你好运！ |
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玲珑琉璃5楼2015-05-08 09:46:23
玲珑琉璃
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