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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 酵母原生质体酶解问题
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pitty595

铜虫 (小有名气)

[交流] 酵母原生质体酶解问题

参照同行的实验方案，用zymolyase降解酵母细胞壁制备原生质体时，通过细胞在山梨醇（细胞完整）和SDS（细胞裂解）中的OD600比值来判断是否酶解完成，按方案应该OD比值在5：1甚至20：1的时候表明基本细胞酶解完成，问题是：在我操作的过程中，一直没有出现这么高的比值，在山梨醇和在SDS中细胞的OD值最高不超过3倍，即便延长处理时间到2小时以上都没有这么明显的比值，而且，随着时间的延长，酵母在山梨醇和在SDS中的OD值都在同时下降！
我的问题是：1.为什么随酶处理时间增加，酵母细胞在山梨醇中的OD值也会一直下降？是不是酶解过度细胞已经裂解了？但如果是酶解过度的话，按理说应该能观测到跟SDS处理的OD比值很高（例如方案提供的10-20倍）。
2. 为什么在山梨醇和SDS中均出现OD下降，但比值却一直维持在2：1左右而不增加？是否没有降解细胞壁，而是酶直接导致部分细胞裂解？
反复做了好几遍，还是一样的问题，这样得到的原生质体转化子没有或者最多1个。请大家帮忙看看问题在哪里？谢谢！
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1楼 2015-04-29 13:08:12
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pitty595

铜虫 (小有名气)
这都是什么回复，啥也没有
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13楼2015-04-29 14:08:05
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sumoeric

金虫 (小有名气)
★
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楼主 解决问题了吗？我用lyticase处理就算酶浓度达到了要求的100倍，还是没什么明显变化之多就能够达到50%。请问你现在怎么办？
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14楼2016-01-26 15:51:40
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察亚平

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主，你的问题我不清楚。请问你的zymolyase怎么配置的？我买的试剂是zymolyase -20T上面没有说质量，只有最少酶活性，不知道怎么配置母液？
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15楼2017-03-13 14:39:08
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syhorchid2楼
2015-04-29 13:21   回复  
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zhchzhsh20763楼
2015-04-29 13:26   回复  
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dmbb4楼
2015-04-29 13:28   回复  
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hydzp5楼
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neu2346楼
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寻找cock7楼
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gltsycw8楼
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laom20139楼
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miaojiabing10楼
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jixiangbao11楼
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天涯201212楼
2015-04-29 13:49   回复  
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