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[交流]
酵母原生质体酶解问题
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参照同行的实验方案，用zymolyase降解酵母细胞壁制备原生质体时，通过细胞在山梨醇（细胞完整）和SDS（细胞裂解）中的OD600比值来判断是否酶解完成，按方案应该OD比值在5：1甚至20：1的时候表明基本细胞酶解完成，问题是：在我操作的过程中，一直没有出现这么高的比值，在山梨醇和在SDS中细胞的OD值最高不超过3倍，即便延长处理时间到2小时以上都没有这么明显的比值，而且，随着时间的延长，酵母在山梨醇和在SDS中的OD值都在同时下降！ 我的问题是：1.为什么随酶处理时间增加，酵母细胞在山梨醇中的OD值也会一直下降？是不是酶解过度细胞已经裂解了？但如果是酶解过度的话，按理说应该能观测到跟SDS处理的OD比值很高（例如方案提供的10-20倍）。 2. 为什么在山梨醇和SDS中均出现OD下降，但比值却一直维持在2：1左右而不增加？是否没有降解细胞壁，而是酶直接导致部分细胞裂解？ 反复做了好几遍，还是一样的问题，这样得到的原生质体转化子没有或者最多1个。请大家帮忙看看问题在哪里？谢谢！ |
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