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高效液相色谱的方法学验证问题，稀里糊涂的，求助（急）已有1人参与
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1.我想请问一下，标准曲线范围是怎么确定的？定量下限是最低点，是吗？那么定量上限怎么确定？是线性范围越大越好吗？ 2.我想请问一下，精密度实验是低中高三个浓度各一份，连进5针，还是低中高浓度3个浓度5份，每个进一针算精密度？ 3.请问回收率实验是这样测吗？加空白血清样品处理后，200ug/mL预计稀释为20ug/mL。而同时用甲醇把200ug/mL稀释成20的，将两个峰面积相比求回收率可以吗？ 4.室温稳定性试验是室温下低中高浓度（含空白血清）放置0,2,4,6...h，一个样品一次进几针为好？还有是把每次的平均值凑在一起算RSD值吗？ 5.我现在的色谱峰型不是太尖，顶端像坡一样，峰型有轻微的拖尾，我想问一下改变PH和波长可以改善吗？老师说波长改变后光栅就可能调不回原来的位置，是这样吗？ 6.我用外标法测生物样品，可行吗？对以后发文章有影响吗？ 我的问题有点多，麻烦各位耐心看完，给我一点建议和帮助，多谢多谢！！！！！！！！  |
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lizhihen
木虫 (小有名气)
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
pookally: 金币+5, ★有帮助, 我做的是生物药，还是有些不一样的，有人回我了，O(∩_∩)O谢谢！ 2015-06-03 21:51:33
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问题一：标准曲线的范围，是做有关物质吗？如果是，一般建议是：定量限~120%指标浓度 问题二：精密度（重复性）：方法一：同一浓度，至少测定6次 方法二：3个不同浓度，9次测定结果 问题三：我是做化药原料药的，以有关物质为例，回收率是通过加杂做的 问题四：稳定性试验，我们是只进一阵，以0h为标准计算回收率的 问题五：峰不尖，是不是过载了？拖尾的可能性就比较多了，可以尝试改变PH和波长，至于你老是说的什么波长 调整和光栅的关系，我就不明白了。不知道楼主具体用的什么仪器，应该不至于脆弱到波长都不能调整吧。 为题六：你得请教做生物方面的了，爱莫能助。 小结：方法验证的相关项目药典附录的药品质量标准分析方法验证指导原则对相关项目有具体描述，你应该去仔细看看。 |
2楼2015-04-28 11:03:40