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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 大肠杆菌发酵求助
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bihai0024

金虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌发酵求助 已有4人参与

各位朋友大家好。
我在做大肠杆菌基因工程菌发酵的前期，也就是诱导之前，镜检出现以下形态

部分呈现丝状，我一直以为是处于分裂状态的大肠杆菌（由于生长速度较快，导致未能完全二分裂，呈现丝状）。在诱导表达后，菌体均呈现类似小球的形态，由于我表达的产物是包涵体，因此我原来以为呈现小球状是因为包涵体被染色导致。

最近看资料说是上述现象的产生，有可能是污染了芽孢杆菌，诱导前期的丝状是芽孢杆菌的形态，诱导后的小球状，是形成了芽孢。但是，出现上述情况后，我的蛋白表达又是正常的额，所以比较迷茫，特来请教一下大家。
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1楼 2015-04-22 11:14:43
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bihai0024 at 2015-04-23 14:27:00
需要进行重新转化筛选吗？
我印象里，好像这个品种从一开始挑取转化的单菌落就是这个样子。但最早的时候，产物合成后期不会出现类似球菌的情况。还是保持基本完好的杆菌形态，不过一端的染色很深，我以为是包涵体 ...

这个是感受态的问题，需要重新换感受态，目前国内有几家的感受态都不同程度的出了问题，国外的invitrogen的也出了问题，建议你最好买甘油菌试试，如果你不做吨级以上的发酵，凑合着用用就行了。
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6楼2015-04-23 16:14:06
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liuqian1018

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果想检测是否是芽胞杆菌染菌可以做一下孔雀绿染色，专门染芽孢，一目了然。大肠杆菌肯定不可能那么长。
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2楼2015-04-22 14:03:07
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2015-05-15 08:59:08
你这个是种子退化引起的；现在这种情况看，10L和100L的罐子上做做还可以，但偶尔会出现失败的情况；如果想在吨级的罐子上做，风险非常大；估计两到三个月后可能10L的罐子上成功率会降到40%以下。
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3楼2015-04-23 11:32:30
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bihai0024

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ganchao1776 at 2015-04-23 11:32:30
你这个是种子退化引起的；现在这种情况看，10L和100L的罐子上做做还可以，但偶尔会出现失败的情况；如果想在吨级的罐子上做，风险非常大；估计两到三个月后可能10L的罐子上成功率会降到40%以下。

需要进行重新转化筛选吗？
我印象里，好像这个品种从一开始挑取转化的单菌落就是这个样子。但最早的时候，产物合成后期不会出现类似球菌的情况。还是保持基本完好的杆菌形态，不过一端的染色很深，我以为是包涵体，一端的染色很浅，我认为是菌体状态不好了。
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4楼2015-04-23 14:27:00
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