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bihai0024

金虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌发酵求助已有4人参与

各位朋友大家好。
我在做大肠杆菌基因工程菌发酵的前期,也就是诱导之前,镜检出现以下形态

部分呈现丝状,我一直以为是处于分裂状态的大肠杆菌(由于生长速度较快,导致未能完全二分裂,呈现丝状)。在诱导表达后,菌体均呈现类似小球的形态,由于我表达的产物是包涵体,因此我原来以为呈现小球状是因为包涵体被染色导致。

最近看资料说是上述现象的产生,有可能是污染了芽孢杆菌,诱导前期的丝状是芽孢杆菌的形态,诱导后的小球状,是形成了芽孢。但是,出现上述情况后,我的蛋白表达又是正常的额,所以比较迷茫,特来请教一下大家。
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liuqian1018

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果想检测是否是芽胞杆菌染菌可以做一下孔雀绿染色,专门染芽孢,一目了然。大肠杆菌肯定不可能那么长。
2楼2015-04-22 14:03:07
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助! 2015-05-15 08:59:08
你这个是种子退化引起的;现在这种情况看,10L和100L的罐子上做做还可以,但偶尔会出现失败的情况;如果想在吨级的罐子上做,风险非常大;估计两到三个月后可能10L的罐子上成功率会降到40%以下。
3楼2015-04-23 11:32:30
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普通回帖

bihai0024

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ganchao1776 at 2015-04-23 11:32:30
你这个是种子退化引起的;现在这种情况看,10L和100L的罐子上做做还可以,但偶尔会出现失败的情况;如果想在吨级的罐子上做,风险非常大;估计两到三个月后可能10L的罐子上成功率会降到40%以下。

需要进行重新转化筛选吗?
我印象里,好像这个品种从一开始挑取转化的单菌落就是这个样子。但最早的时候,产物合成后期不会出现类似球菌的情况。还是保持基本完好的杆菌形态,不过一端的染色很深,我以为是包涵体,一端的染色很浅,我认为是菌体状态不好了。
4楼2015-04-23 14:27:00
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棘白菌素

铜虫 (正式写手)

正常现象,不用管它
青春留不住,白发自然生!
5楼2015-04-23 14:38:35
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
4楼: Originally posted by bihai0024 at 2015-04-23 14:27:00
需要进行重新转化筛选吗?
我印象里,好像这个品种从一开始挑取转化的单菌落就是这个样子。但最早的时候,产物合成后期不会出现类似球菌的情况。还是保持基本完好的杆菌形态,不过一端的染色很深,我以为是包涵体 ...

这个是感受态的问题,需要重新换感受态,目前国内有几家的感受态都不同程度的出了问题,国外的invitrogen的也出了问题,建议你最好买甘油菌试试,如果你不做吨级以上的发酵,凑合着用用就行了。
6楼2015-04-23 16:14:06
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bihai0024

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by ganchao1776 at 2015-04-23 16:14:06
这个是感受态的问题,需要重新换感受态,目前国内有几家的感受态都不同程度的出了问题,国外的invitrogen的也出了问题,建议你最好买甘油菌试试,如果你不做吨级以上的发酵,凑合着用用就行了。...

好的。谢谢您了。
7楼2015-04-24 08:46:20
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monky

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

有一种情况是发酵培养基原料代入的,如果消毒后培养基中也有这种菌丝,就有可能是这种情况。这种情况并不影响发酵
8楼2015-04-25 21:41:57
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jiweiweiw

银虫 (小有名气)

我的也出现了这种情况,不过老师说1是染菌,2是处于生长旺盛期,有分裂的有没分裂的,他看我的图片说应该是第二种情况!
大肠杆菌发酵求助
17h.jpg

9楼2015-05-14 23:06:19
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-字仲康

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

10楼2016-05-21 14:30:02
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