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xuekong

木虫 (小有名气)

[交流] 蛋白电泳问题

最近在做二维电泳,但一直出现问题,希望各位大神能够提出宝贵建议!
1,SDS-PAGE配完浓缩胶后,发现它收缩的很严重,基本上连上样孔都没有了。
2,跑出来的条带,染完色后颜色很浅,连MAKER(碧云天,15u量)都看不见,但是条带分的开。
3,用丙酮沉淀蛋白,纯化后的样做SDS-PAGE预实验时,发现条带不清晰,模糊,有拖尾现象。
注:现在的30%胶,缓冲液以及AP都是新配置的,而且去年坐时没有出过这种问题(样品都是自己配的)。
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Deeds,notwords
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2楼2015-04-19 11:51:19
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halfbeer

捐助贵宾 (小有名气)

这是啥?

30 的胶,太高吧

[ 发自小木虫客户端 ]
现在我们能做的就是努力努力再努力
3楼2015-04-20 06:53:17
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4楼2015-04-20 08:05:13
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roy5513

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by halfbeer at 2015-04-20 06:53:17
30 的胶,太高吧

楼主说的是母液吧
5楼2015-04-20 08:35:50
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xiaochong8693

木虫之王 (文坛精英)

为楼主祈福,帮顶,祝福好运!~~~~~~~~~~~~~~~~~~
6楼2015-04-20 08:46:24
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
做的是原核蛋白表达么?连上样孔都看不见。。。你的胶是怎么配的?插孔晾干时放置了多久啊?
可以尝试加大上样量试试,还有要排除分离胶制备中是否有问题
其实我个人感觉是你分离胶浓度过大了。。。
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
7楼2015-04-20 12:30:07
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