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xuekong

木虫 (小有名气)

[交流] 蛋白电泳问题

最近在做二维电泳，但一直出现问题，希望各位大神能够提出宝贵建议！
1，SDS-PAGE配完浓缩胶后，发现它收缩的很严重，基本上连上样孔都没有了。
2，跑出来的条带，染完色后颜色很浅，连MAKER（碧云天，15u量）都看不见，但是条带分的开。
3，用丙酮沉淀蛋白，纯化后的样做SDS-PAGE预实验时，发现条带不清晰，模糊，有拖尾现象。
注：现在的30%胶，缓冲液以及AP都是新配置的，而且去年坐时没有出过这种问题（样品都是自己配的）。
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Deeds,notwords
1楼 2015-04-19 11:21:05
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810043138
2楼2015-04-19 11:51:19
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halfbeer

捐助贵宾 (小有名气)

这是啥？
30 的胶，太高吧

[ 发自小木虫客户端 ]
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现在我们能做的就是努力努力再努力
3楼2015-04-20 06:53:17
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8wangle
4楼2015-04-20 08:05:13
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roy5513

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by halfbeer at 2015-04-20 06:53:17
30 的胶，太高吧

楼主说的是母液吧
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5楼2015-04-20 08:35:50
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xiaochong8693

木虫之王 (文坛精英)
为楼主祈福，帮顶，祝福好运！~~~~~~~~~~~~~~~~~~
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6楼2015-04-20 08:46:24
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做的是原核蛋白表达么？连上样孔都看不见。。。你的胶是怎么配的？插孔晾干时放置了多久啊？
可以尝试加大上样量试试，还有要排除分离胶制备中是否有问题
其实我个人感觉是你分离胶浓度过大了。。。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
7楼2015-04-20 12:30:07
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