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luckydog52

木虫 (著名写手)

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[求助] 突变株和野生型间 western blot 的条带颜色比例和酶活测量值的比例不一致正常吗？已有1人参与

我做的是外源蛋白的表达优化。
我的突变株的外源目的蛋白的western blot 的条带颜色比野生型浅，大概十分之一。

而突变株的外源目的蛋白的酶活测量值却是野生型的一半左右。

这种情况正常吗？

有没有合理的解释啊，谢谢大家了

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1楼 2015-04-18 00:21:33

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luwei13566

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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luckydog52: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 谢谢啦回答很有帮助哦 2015-04-22 17:46:06

很正常，你测酶活应该是拿发酵液离心的上清来测的吧，测的实际是个上清里的总酶活，如果你的上清液里有与你的目标酶功能相似的酶系存在自然会影响你测得酶活的数值，而你的WB是用特异性抗体做的，又不会把所有功能相似的酶都给抗出来。这种现象在胞外水解酶系里更常见，一个主要水解酶外加几个辅助的水解酶，如果酶活测的是还原糖的话不是这个现象反而还有点不正常