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打败番茄炒蛋

新虫 (小有名气)

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[求助] 一个多周一直在pcr 16S，终于p出来了，没想到是这种结果。。。已有1人参与

本人初学者，最近一个周一直在用TAKARA的试剂盒PCR三个菌的16S。
两幅图（没有图我不会乱说）第一条带都是maker DL2000，第二、三、四条带都是菌体的基因组：
（第一幅图是改使用了生工的试剂盒，P得结果怪怪的。。

）
（之前用rTaq酶一直都没有P出来，改用了LA Taq酶得第二幅图，第二幅图用的是TAKARA试剂盒

）
各位看官老爷请给个建议或者提示

。没有多少金币求怜惜

16s .jpg

16s.jpg

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1楼 2015-04-17 10:19:38

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3楼: Originally posted by 打败番茄炒蛋 at 2015-04-18 12:05:37
1.5kb 左右，应该在maker的第一条亮带和第二条亮带之间。
还有请问我扩16s 为什么会出现两条两带呢。。？...

你1.5kb的目的片段式P出来了对吗
你说的16S出现两个条带的问题，首先，要不它可能本身的问题，其次，是非特异性产物（关系到引物设计，模板，扩增使用的DNA聚合酶的特异性，你现在1.5kb的片段，不建议用LA Taq酶，一般特异性好的热启动酶倒是可以一试）

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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful

4楼2015-04-20 09:33:04

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

第二张看着结果还行啊，关键是你的目标片段多大啊？

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2楼2015-04-17 11:16:42

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2楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-04-17 11:16:42
第二张看着结果还行啊，关键是你的目标片段多大啊？

1.5kb 左右，应该在maker的第一条亮带和第二条亮带之间。
还有请问我扩16s 为什么会出现两条两带呢。。？

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天生自弃难丽质

3楼2015-04-18 12:05:37

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4楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-04-20 09:33:04
你1.5kb的目的片段式P出来了对吗
你说的16S出现两个条带的问题，首先，要不它可能本身的问题，其次，是非特异性产物（关系到引物设计，模板，扩增使用的DNA聚合酶的特异性，你现在1.5kb的片段，不建议用LA Taq酶， ...

谢谢！今天送去测样的结果出来了：
1.5Kb的目的片段没有p出来，没有得到测序结果。
另外16s出两条带的结果很怪，在NCBI上比对结果是mRNA。。
我之前用rTaq酶都没有p出来，上面的图都是用了LA Taq酶。
打算再提一次基因组PCR一下

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天生自弃难丽质

5楼2015-04-20 15:01:36

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