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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 一个多周一直在pcr 16S，终于p出来了，没想到是这种结果。。。
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打败番茄炒蛋

新虫 (小有名气)

[求助] 一个多周一直在pcr 16S，终于p出来了，没想到是这种结果。。。 已有1人参与

本人初学者，最近一个周一直在用TAKARA的试剂盒PCR三个菌的16S。
两幅图（没有图我不会乱说）第一条带都是maker DL2000，第二、三、四条带都是菌体的基因组：
（第一幅图是改使用了生工的试剂盒，P得结果怪怪的。。）
（之前用rTaq酶一直都没有P出来，改用了LA Taq酶得第二幅图，第二幅图用的是TAKARA试剂盒）
各位看官老爷请给个建议或者提示。没有多少金币求怜惜

一个多周一直在pcr 16S，终于p出来了，没想到是这种结果。。。
16s .jpg


一个多周一直在pcr 16S，终于p出来了，没想到是这种结果。。。-1
16s.jpg
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天生自弃难丽质
1楼 2015-04-17 10:19:38
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第二张看着结果还行啊，关键是你的目标片段多大啊？
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
2楼2015-04-17 11:16:42
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打败番茄炒蛋

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-04-17 11:16:42
第二张看着结果还行啊，关键是你的目标片段多大啊？

1.5kb 左右，应该在maker的第一条亮带和第二条亮带之间。
还有请问我扩16s 为什么会出现两条两带呢。。？
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天生自弃难丽质
3楼2015-04-18 12:05:37
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

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3楼: Originally posted by 打败番茄炒蛋 at 2015-04-18 12:05:37
1.5kb 左右，应该在maker的第一条亮带和第二条亮带之间。
还有请问我扩16s 为什么会出现两条两带呢。。？...

你1.5kb的目的片段式P出来了对吗
你说的16S出现两个条带的问题，首先，要不它可能本身的问题，其次，是非特异性产物（关系到引物设计，模板，扩增使用的DNA聚合酶的特异性，你现在1.5kb的片段，不建议用LA Taq酶，一般特异性好的热启动酶倒是可以一试）
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-04-20 09:33:04
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打败番茄炒蛋

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-04-20 09:33:04
你1.5kb的目的片段式P出来了对吗
你说的16S出现两个条带的问题，首先，要不它可能本身的问题，其次，是非特异性产物（关系到引物设计，模板，扩增使用的DNA聚合酶的特异性，你现在1.5kb的片段，不建议用LA Taq酶， ...

谢谢！今天送去测样的结果出来了：
1.5Kb的目的片段没有p出来，没有得到测序结果。
另外16s出两条带的结果很怪，在NCBI上比对结果是mRNA。。
我之前用rTaq酶都没有p出来，上面的图都是用了LA Taq酶。
打算再提一次基因组PCR一下
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天生自弃难丽质
5楼2015-04-20 15:01:36
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
引用回帖:
5楼: Originally posted by 打败番茄炒蛋 at 2015-04-20 15:01:36
谢谢！今天送去测样的结果出来了：
1.5Kb的目的片段没有p出来，没有得到测序结果。
另外16s出两条带的结果很怪，在NCBI上比对结果是mRNA。。
我之前用rTaq酶都没有p出来，上面的图都是用了LA Taq酶。
打算再提 ...

我就觉得你的1.5kb就没有出来（看图就不对劲。。），，，但是你却说你P出来了，搞得我更疑惑啊。。。解决就好
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
6楼2015-04-21 08:40:49
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打败番茄炒蛋

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-04-21 08:40:49
我就觉得你的1.5kb就没有出来（看图就不对劲。。），，，但是你却说你P出来了，搞得我更疑惑啊。。。解决就好...

谢谢！原来是实验室的引物有问题！
已经P出来了，大小也是1.5kb。
觉得分子实验真是个大坑。。一遍一遍试了接近20次才发现是引物不对。。
谢谢你的应助和回复！祝你身体健康，实验顺利，生活顺心~
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天生自弃难丽质
7楼2015-04-22 14:43:04
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
引用回帖:
7楼: Originally posted by 打败番茄炒蛋 at 2015-04-22 14:43:04
谢谢！原来是实验室的引物有问题！
已经P出来了，大小也是1.5kb。
觉得分子实验真是个大坑。。一遍一遍试了接近20次才发现是引物不对。。
谢谢你的应助和回复！祝你身体健康，实验顺利，生活顺心~...

哈哈，不谢
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
8楼2015-04-22 16:59:49
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