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1376513021

木虫 (正式写手)

[求助] MTT检测细胞甲臢生成不均匀 已有1人参与


这是最近用MTT检测的HepG2细胞,37度孵育了4h(该HepG2细胞用LPS刺激了一天后又做的MTT检测),颜色深的地方是甲臢,靠近孔的边缘;浅的地方也有细胞而且是贴壁状态(活的),但没甲臢生成,一样条件培养结果相差很大,本人在网上查了很多,这方面的介绍很少,希望大神不吝赐教…………
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天道酬勤
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cvcy2046

金虫 (正式写手)

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1376513021: 金币+5, 有帮助 2015-04-13 10:34:43
重悬时是否确定为单细胞悬液么?(可以通过倒置显微镜观看)我每次加细胞之后都会吹打几次悬液,枪头对着孔(96孔板)内壁较快速的打入,一个板加完后都要水平摇几下,在显微镜下观看都很均匀的!加MTT也是这种操作!

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2楼2015-04-12 19:55:52
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cvcy2046

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by cvcy2046 at 2015-04-12 19:55:52
重悬时是否确定为单细胞悬液么?(可以通过倒置显微镜观看)我每次加细胞之后都会吹打几次悬液,枪头对着孔(96孔板)内壁较快速的打入,一个板加完后都要水平摇几下,在显微镜下观看都很均匀的!加MTT也是这种操作 ...

一般MTT(5mg/ml)都加20ul(细胞100ul+药物100ul)

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3楼2015-04-12 19:58:31
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1376513021

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cvcy2046 at 2015-04-12 19:58:31
一般MTT(5mg/ml)都加20ul(细胞100ul+药物100ul)
...

细胞悬液确定为单细胞,种板也可以,MTT最终浓度也为0.5mg/ml,就是上方细胞未产生甲臢,师兄说可能是细胞状态不好…………不知道各位有没其他高见…………
天道酬勤
4楼2015-04-13 10:34:12
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cvcy2046

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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1376513021: 金币+5, 有帮助 2015-04-14 10:34:14
引用回帖:
4楼: Originally posted by 1376513021 at 2015-04-13 10:34:12
细胞悬液确定为单细胞,种板也可以,MTT最终浓度也为0.5mg/ml,就是上方细胞未产生甲臢,师兄说可能是细胞状态不好…………不知道各位有没其他高见…………...

HepG2我养过,观看状态时,细胞有被腐蚀的现象,就是细胞中间有黑点,就像人脸上的雀斑一样,但是仍能做实验,也没有像你说的那样甲瓒不均匀。你先看细胞状态怎么样,可以加大细胞密度,我一般做MTT都是50000个/ml的密度!

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5楼2015-04-13 11:54:01
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