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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » MTT测细胞毒性铺板细胞浓度
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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

[求助] MTT测细胞毒性铺板细胞浓度 已有6人参与

在做MTT测细胞毒性时，铺板时细胞的浓度怎么把握啊？觉得用计数器数细胞太麻烦，能不能直接根据经验来稀释细胞呢，比如一瓶长满的细胞稀释到什么程度种板比较合适呢？
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1楼 2014-03-10 10:28:56
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

我听五月天

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by luo_jiaojiao at 2014-05-06 09:50:41
我们学校这边条件有限啊，超净台和显微镜不在同一个房间，中间隔着几道门呢，所以用计数器的话感觉还是比较麻烦的。师姐们都是按经验来的，满瓶细胞的1/6铺60个孔，这个密度合适吗？...

原来如此~我觉得一瓶铺6*60个差不多。因为我很少把一整瓶都铺板，一般是一瓶长满取一半出来稀释到30毫升左右来铺两块板子。以我现在学到的，最好是细胞长到底部面积的80%左右，是对数期，最好用这个阶段的细胞做实验；占得满满的那就已经挤了。这些都是理论不谈也罢，影响不大。你师姐们的经验你可以试试，如果做出来吸光值太小可以适量加大。MTT实验最后读数在0.1-0.7左右比较好。
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为爱而生
10楼2014-05-06 22:04:45
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普通回帖

CacaoPie

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
luo_jiaojiao: 金币+1, ★有帮助 2014-05-06 09:48:09
我养的肝癌细胞，不知道你是用多大的培养瓶养的，我的长满细胞可能在80000个细胞左右吧，稀释20倍刚好在4000的样子
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2楼2014-03-10 12:29:24
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ventitre

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 金币+1 2014-05-06 16:17:59
其实你所谓的经验也是在多次培养细胞并且用计数法多次测定细胞数量之后总结出来的，所以，我们实验室铺板的时候一般不会省略计数器这一步
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药剂
3楼2014-03-10 16:26:43
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我听五月天

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
luo_jiaojiao: 金币+1, ★有帮助 2014-05-06 09:48:22
youlinglyw: 金币+1 2014-05-06 16:18:10
计数器记的都只是数量级，五千八千都说不准，你还想省略~~~
计数板数一下，也就五分钟足够了。
你先把悬液（25cm2的瓶子）做成20毫升左右，应该不会太稀，比较好数。最终密度要根据文献上说的来定。
我铺了几次都是先计数的，
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为爱而生
4楼2014-03-10 21:52:11
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woaimeizhi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by CacaoPie at 2014-03-10 12:29:24
我养的肝癌细胞，不知道你是用多大的培养瓶养的，我的长满细胞可能在80000个细胞左右吧，稀释20倍刚好在4000的样子

我养的 也是肝癌细胞，我细胞上面有层黄色的粘附物，但是培养基很干净，细胞状态也很好，您遇到这种情况吗
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5楼2014-03-10 22:13:28
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洛克2014

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
前期的时候还是用计数器数数吧，做多了自己就能把握一个量的，每次都数要是量也多，那就真的是累了。这个计数范围其实还是比较大的，没必要太精确。
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6楼2014-03-10 22:29:47
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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 我听五月天 at 2014-03-10 21:52:11
计数器记的都只是数量级，五千八千都说不准，你还想省略~~~
计数板数一下，也就五分钟足够了。
你先把悬液（25cm2的瓶子）做成20毫升左右，应该不会太稀，比较好数。最终密度要根据文献上说的来定。
我铺了 ...

我们学校这边条件有限啊，超净台和显微镜不在同一个房间，中间隔着几道门呢，所以用计数器的话感觉还是比较麻烦的。师姐们都是按经验来的，满瓶细胞的1/6铺60个孔，这个密度合适吗？
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7楼2014-05-06 09:50:41
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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by CacaoPie at 2014-03-10 12:29:24
我养的肝癌细胞，不知道你是用多大的培养瓶养的，我的长满细胞可能在80000个细胞左右吧，稀释20倍刚好在4000的样子

一般用50mL培养瓶，师姐们用满瓶细胞的1/6铺60个孔，这个密度可以么……
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8楼2014-05-06 09:52:59
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千年觉哲

金虫 (初入文坛)

金冲冲

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by luo_jiaojiao at 2014-05-06 09:52:59
一般用50mL培养瓶，师姐们用满瓶细胞的1/6铺60个孔，这个密度可以么……...

跟瓶子底面积  细胞大小都是有关系的，你要是感觉计数麻烦，你就多做几次计数得，观察一下一般你这个细胞需要稀释多少倍。
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顶顶顶
9楼2014-05-06 15:17:41
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