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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » MTT检测细胞甲臢生成不均匀
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1376513021

木虫 (正式写手)

[求助] MTT检测细胞甲臢生成不均匀 已有1人参与


这是最近用MTT检测的HepG2细胞，37度孵育了4h（该HepG2细胞用LPS刺激了一天后又做的MTT检测），颜色深的地方是甲臢，靠近孔的边缘；浅的地方也有细胞而且是贴壁状态（活的），但没甲臢生成，一样条件培养结果相差很大，本人在网上查了很多，这方面的介绍很少，希望大神不吝赐教…………
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天道酬勤
1楼 2015-04-12 19:28:31
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cvcy2046

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1376513021: 金币+5, ★有帮助 2015-04-13 10:34:43
重悬时是否确定为单细胞悬液么？（可以通过倒置显微镜观看）我每次加细胞之后都会吹打几次悬液，枪头对着孔（96孔板）内壁较快速的打入，一个板加完后都要水平摇几下，在显微镜下观看都很均匀的！加MTT也是这种操作！

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2楼2015-04-12 19:55:52
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cvcy2046

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by cvcy2046 at 2015-04-12 19:55:52
重悬时是否确定为单细胞悬液么？（可以通过倒置显微镜观看）我每次加细胞之后都会吹打几次悬液，枪头对着孔（96孔板）内壁较快速的打入，一个板加完后都要水平摇几下，在显微镜下观看都很均匀的！加MTT也是这种操作 ...

一般MTT（5mg/ml）都加20ul（细胞100ul＋药物100ul）

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3楼2015-04-12 19:58:31
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1376513021

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cvcy2046 at 2015-04-12 19:58:31
一般MTT（5mg/ml）都加20ul（细胞100ul＋药物100ul）
...

细胞悬液确定为单细胞，种板也可以，MTT最终浓度也为0.5mg/ml，就是上方细胞未产生甲臢，师兄说可能是细胞状态不好…………不知道各位有没其他高见…………
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天道酬勤
4楼2015-04-13 10:34:12
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cvcy2046

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
1376513021: 金币+5, ★有帮助 2015-04-14 10:34:14
引用回帖:
4楼: Originally posted by 1376513021 at 2015-04-13 10:34:12
细胞悬液确定为单细胞，种板也可以，MTT最终浓度也为0.5mg/ml，就是上方细胞未产生甲臢，师兄说可能是细胞状态不好…………不知道各位有没其他高见…………...

HepG2我养过，观看状态时，细胞有被腐蚀的现象，就是细胞中间有黑点，就像人脸上的雀斑一样，但是仍能做实验，也没有像你说的那样甲瓒不均匀。你先看细胞状态怎么样，可以加大细胞密度，我一般做MTT都是50000个/ml的密度！

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5楼2015-04-13 11:54:01
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