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smyoung

新虫 (小有名气)

[交流] MTT试验中,加药孔的吸光值,为什么比空白还大。排除细胞接的不匀因素 已有4人参与

最近做了3次MTT实验,结果都很不理想。加药孔的吸光值比空白的还大。和开学初的结果相差太大。哪位高人能帮忙分析一下原因
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l_h_10

金虫 (小有名气)

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看天: 金币+3, 鼓励交流 2012-10-07 22:14:39
加药孔与空白差异大吗?我自己的经验来说,有时候污染的时候,吸光度就会很大。你看加药孔的细胞了吗,细胞比空白孔多吗?加MTT前,吸掉药物了没?有时候MTT和药物会反应导致吸光度值变大。
2楼2012-06-24 23:33:56
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smyoung

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by l_h_10 at 2012-06-24 23:33:56
加药孔与空白差异大吗?我自己的经验来说,有时候污染的时候,吸光度就会很大。你看加药孔的细胞了吗,细胞比空白孔多吗?加MTT前,吸掉药物了没?有时候MTT和药物会反应导致吸光度值变大。

镜检可以看见细胞已经死亡,但是测出的值不对。而且没有染菌,细胞分散也很均匀
3楼2012-06-25 10:12:04
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l_h_10

金虫 (小有名气)

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看天: 金币+2, 鼓励回答 2012-10-07 22:15:15
难道是药物与MTT反应了?加MTT前把加药的培养基洗出,再加入MTT。这个差异挺大的。
4楼2012-06-25 20:59:00
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smyoung

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by l_h_10 at 2012-06-25 20:59:00
难道是药物与MTT反应了?加MTT前把加药的培养基洗出,再加入MTT。这个差异挺大的。

怎么洗呢,用PBS吗?
5楼2012-06-25 21:42:01
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l_h_10

金虫 (小有名气)

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看天: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-07 22:15:26
我的做法是药物作用够时间后,把加了药物的培养基吸出来,(PBS加进去再吸出来,洗一边也可)把MTT加在新的培养液里加进去。再孵育2-4小时即可。
6楼2012-06-26 13:04:45
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smyoung

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by l_h_10 at 2012-06-26 13:04:45
我的做法是药物作用够时间后,把加了药物的培养基吸出来,(PBS加进去再吸出来,洗一边也可)把MTT加在新的培养液里加进去。再孵育2-4小时即可。

原来这样啊,真是谢谢啦
7楼2012-06-27 22:03:11
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zitaoguo

铜虫 (小有名气)

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看天: 金币+2, 鼓励 常来 2012-10-07 22:15:48
好像测试的药如果还原性强的话,对结果的影响很大的。所以最好在加MTT之前洗一下
,祝你实验成功

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Fighting
8楼2012-06-28 16:17:00
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smyoung

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by zitaoguo at 2012-06-28 16:17:00
好像测试的药如果还原性强的话,对结果的影响很大的。所以最好在加MTT之前洗一下
,祝你实验成功

真是谢谢啦
9楼2012-06-30 10:51:39
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静天之蓝

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
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看天: 金币+2, 鼓励 常来 2012-10-07 22:16:00
必须是pba洗 2到3遍 然后吸出洗涤液 然后加dmso 酶标测
10楼2012-10-07 09:39:48
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