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iammfx

新虫 (著名写手)

[求助] MTT 加药孔变“墨汁” 已有1人参与

加人MTT后不知多久就变的黢黑。。跟墨汁似的。 不知原因为何。。浅颜色的都是未加药组的。 把药物和培养液 和MTT 混合 也没啥变化。。求知情人士详解。。感激不尽

加入MTT孵育4H后未加入DMSO

[ Last edited by silicare on 2014-3-28 at 14:02 ]
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mltr8539

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流,祝顺利! 2011-11-01 09:37:10
估计你细胞量太大了吧……再有可能就是染菌什么的,不用4小时就黑了。你的药如果有很强的还原性的话,估计也会是这样。
2楼2011-10-28 19:41:01
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普通回帖

迷情八月

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

细胞接种量是多少?可能是细胞量太大,或者药物跟MTT 会反应 查查文献
3楼2011-10-28 20:28:53
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jiao63415719

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

我最近也正要做MTT呢.但还在做浓度和吸光值 的,不知道能不能做出个0.9999的曲线.是不是染菌了?多多交流.
4楼2011-10-28 23:57:55
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iammfx

新虫 (著名写手)

正常孔没问题啊。。所有孔细胞数都是一样的。。唉
5楼2011-10-31 14:15:53
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kno3

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利! 2011-11-01 09:37:56
药物与细胞作用产生的物质的还原性太强了吧。用无血清的培养液配MTT,弃掉加药的培养液,换上加有MTT的培养液孵育试试吧。换MTT培养液时,可以先洗一下细胞,去除还原性物质。
6楼2011-11-01 00:11:15
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evelyn_w

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以考虑排查一下是不是污染了。您的药物是无菌配制的么?
7楼2011-11-01 09:51:38
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tingxue

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by kno3 at 2011-11-01 00:11:15:
药物与细胞作用产生的物质的还原性太强了吧。用无血清的培养液配MTT,弃掉加药的培养液,换上加有MTT的培养液孵育试试吧。换MTT培养液时,可以先洗一下细胞,去除还原性物质。

先洗一下细胞,不会把细胞洗掉造成平行性不好吗?MTT实验本身的平行性就很差。我在做药物对细胞杀伤的实验中,想找到半数致死率的浓度,但是发现药物作用后OD值比对照组的还高,很是纳闷,并且与镜检结果不符,而且我做的时候也是用无血清培养液配的MTT,并且也弃掉加药的培养液,应该说排除了细胞代谢产生物质对结果的影响。请教一下!
8楼2011-11-03 09:45:36
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skyipengtu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是不是你的药物具有氧化还原性质?如果药物有氧化还原性的话,会让你的MTT变性,变成这种深色的
9楼2012-06-08 10:50:23
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skyipengtu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你在加MTT之前可以先用PBS把96孔清洗下,注意不要把细胞洗掉了..贴壁清洗。。然后再加MTT,应该会好很多
10楼2012-06-08 10:52:09
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