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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » MTT 加药孔变“墨汁”
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iammfx

新虫 (著名写手)

[求助] MTT 加药孔变“墨汁” 已有1人参与

加人MTT后不知多久就变的黢黑。。跟墨汁似的。 不知原因为何。。浅颜色的都是未加药组的。 把药物和培养液 和MTT 混合 也没啥变化。。求知情人士详解。。感激不尽

加入MTT孵育4H后未加入DMSO

[ Last edited by silicare on 2014-3-28 at 14:02 ]
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1楼 2011-10-28 16:41:30
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

mltr8539

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流，祝顺利！ 2011-11-01 09:37:10
估计你细胞量太大了吧……再有可能就是染菌什么的，不用4小时就黑了。你的药如果有很强的还原性的话，估计也会是这样。
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2楼2011-10-28 19:41:01
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普通回帖

迷情八月

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

细胞接种量是多少？可能是细胞量太大，或者药物跟MTT 会反应 查查文献
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3楼2011-10-28 20:28:53
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jiao63415719

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

我最近也正要做MTT呢.但还在做浓度和吸光值 的,不知道能不能做出个0.9999的曲线.是不是染菌了?多多交流.
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4楼2011-10-28 23:57:55
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iammfx

新虫 (著名写手)
正常孔没问题啊。。所有孔细胞数都是一样的。。唉
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5楼2011-10-31 14:15:53
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kno3

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-11-01 09:37:56
药物与细胞作用产生的物质的还原性太强了吧。用无血清的培养液配MTT，弃掉加药的培养液，换上加有MTT的培养液孵育试试吧。换MTT培养液时，可以先洗一下细胞，去除还原性物质。
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6楼2011-11-01 00:11:15
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evelyn_w

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以考虑排查一下是不是污染了。您的药物是无菌配制的么？
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7楼2011-11-01 09:51:38
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tingxue

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by kno3 at 2011-11-01 00:11:15:
药物与细胞作用产生的物质的还原性太强了吧。用无血清的培养液配MTT，弃掉加药的培养液，换上加有MTT的培养液孵育试试吧。换MTT培养液时，可以先洗一下细胞，去除还原性物质。

先洗一下细胞，不会把细胞洗掉造成平行性不好吗？MTT实验本身的平行性就很差。我在做药物对细胞杀伤的实验中，想找到半数致死率的浓度，但是发现药物作用后OD值比对照组的还高，很是纳闷，并且与镜检结果不符，而且我做的时候也是用无血清培养液配的MTT，并且也弃掉加药的培养液，应该说排除了细胞代谢产生物质对结果的影响。请教一下！
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8楼2011-11-03 09:45:36
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skyipengtu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是不是你的药物具有氧化还原性质？如果药物有氧化还原性的话，会让你的MTT变性，变成这种深色的
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9楼2012-06-08 10:50:23
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skyipengtu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你在加MTT之前可以先用PBS把96孔清洗下，注意不要把细胞洗掉了..贴壁清洗。。然后再加MTT，应该会好很多
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10楼2012-06-08 10:52:09
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