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AZUREIRIS

银虫 (初入文坛)


[求助] 大肠杆菌red重组,电转总是失败,求助大神。。。 已有1人参与

我最近在做大肠杆菌的red重组,前期已经将原菌株卡那片段敲除,现在准备插入PKD4来敲除另外一个基因。但是用电转法一直不成功,细胞电转前水洗了4次,可是师兄说电转失败还是没有洗干净,求教怎么能彻底洗干净,或者,其他环节有什么地方可以改进的,比如菌体浓度大概长到OD多少,我每次没有测OD ,直接目测,长了6小时,比较浓,有点像牛奶。还有一个对照长了4小时,比较淡。。新手金币比较少,还望大神帮我。。。多谢。。。。
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浅语8905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们一般先用水洗两次,再用10%甘油洗一次,离心倒上清,余液浓缩成5管左右,OD一般在0.4左右开始做感受态,200ml浓缩成5管,菌体浓度也是足够了
2楼2015-04-09 14:02:56
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AZUREIRIS

银虫 (初入文坛)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 浅语8905 at 2015-04-09 14:02:56
我们一般先用水洗两次,再用10%甘油洗一次,离心倒上清,余液浓缩成5管左右,OD一般在0.4左右开始做感受态,200ml浓缩成5管,菌体浓度也是足够了

我没有用甘油洗,一般都是无菌水洗,请问这个有影响么?
3楼2015-04-09 14:37:02
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浅语8905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by AZUREIRIS at 2015-04-09 14:37:02
我没有用甘油洗,一般都是无菌水洗,请问这个有影响么?...

我没有这么做过呢,具体影响还真不知道呢
4楼2015-04-10 12:26:59
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