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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 大肠杆菌red重组，电转总是失败，求助大神。。。
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AZUREIRIS

银虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌red重组，电转总是失败，求助大神。。。 已有1人参与

我最近在做大肠杆菌的red重组，前期已经将原菌株卡那片段敲除，现在准备插入PKD4来敲除另外一个基因。但是用电转法一直不成功，细胞电转前水洗了4次，可是师兄说电转失败还是没有洗干净，求教怎么能彻底洗干净，或者，其他环节有什么地方可以改进的，比如菌体浓度大概长到OD多少，我每次没有测OD ，直接目测，长了6小时，比较浓，有点像牛奶。还有一个对照长了4小时，比较淡。。新手金币比较少，还望大神帮我。。。多谢。。。。
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1楼 2015-04-09 11:13:16
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浅语8905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们一般先用水洗两次，再用10%甘油洗一次，离心倒上清，余液浓缩成5管左右，OD一般在0.4左右开始做感受态，200ml浓缩成5管，菌体浓度也是足够了
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2楼2015-04-09 14:02:56
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AZUREIRIS

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 浅语8905 at 2015-04-09 14:02:56
我们一般先用水洗两次，再用10%甘油洗一次，离心倒上清，余液浓缩成5管左右，OD一般在0.4左右开始做感受态，200ml浓缩成5管，菌体浓度也是足够了

我没有用甘油洗，一般都是无菌水洗，请问这个有影响么？
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3楼2015-04-09 14:37:02
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浅语8905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by AZUREIRIS at 2015-04-09 14:37:02
我没有用甘油洗，一般都是无菌水洗，请问这个有影响么？...

我没有这么做过呢，具体影响还真不知道呢
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4楼2015-04-10 12:26:59
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