24小时热门版块排行榜    

查看: 1896  |  回复: 6

280681193

银虫 (小有名气)

[求助] 易错pCR总是得不到我想要的条带,望大神给参考一下,看看哪里可以改进,谢谢 已有1人参与

目的基因Tc-GDH  846bp  质粒pMD18-T  2700bp
50微升体系
dNTP MIX     0.2mM
dGTP dCTP   0.4MM
Mncl2           0.2mM
IF  IR           0.4mM
Taq酶          2.5u
条件:
94               2min
94               30s
60               30s
68               45s
68               5min
20个循环

易错pCR总是得不到我想要的条带,望大神给参考一下,看看哪里可以改进,谢谢
TC-GDH.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-04-01 10:46:09
反应条件看起来很正常啊,还是进行镁离子 锰离子 和四中dNTP浓度的摸索吧,最佳条件总是经过多次摸索才得到的(如果模板太大可能也扩增不出来,你的这个貌似也还好)

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
2楼2015-03-31 10:27:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

280681193

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-03-31 10:27:02
反应条件看起来很正常啊,还是进行镁离子 锰离子 和四中dNTP浓度的摸索吧,最佳条件总是经过多次摸索才得到的(如果模板太大可能也扩增不出来,你的这个貌似也还好)

谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-04-01 09:54:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水-水

新虫 (初入文坛)

体系很正常,Mn离子浓度也不高。1、主要调整Mg离子的浓度,Taq酶必须在有Mg离子的情况下才与模板结合,正确延伸。2、延伸温度应该选72℃。3、退火温度可以在Tm值-5℃的前提下,用温度梯度尝试一下,确定最合适的退火温度。
4楼2015-04-07 13:51:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seraphlx

新虫 (初入文坛)

你好,我想问我在做易错PCR时加入锰离子,浓度跟你差不多,为什么扩出来的有沉淀析出,你遇到过么?谢谢
5楼2015-10-08 19:59:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

280681193

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by seraphlx at 2015-10-08 19:59:14
你好,我想问我在做易错PCR时加入锰离子,浓度跟你差不多,为什么扩出来的有沉淀析出,你遇到过么?谢谢

没有遇到过哎

发自小木虫Android客户端
6楼2015-11-25 10:01:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

103007054025

铜虫 (小有名气)

求助:请问一下,你用的Mncl2是在哪里买的呀?还是自己配的?如果自己配的话需要注意什么吗?非常感谢
7楼2015-12-30 12:42:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 280681193 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-16 03:14 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-16 02:50 by DgNGHc3h5tPl
[找工作] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-16 02:38 by DgNGHc3h5tPl
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-16 02:23 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 申博发邮件 +4 Lmengk 2026-09-15 4/200 2026-09-16 00:05 by 木心想继续深造
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:59 by zNcEhTcH7ihq
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:14 by zNcEhTcH7ihq
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:50 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 18:47 by CgyNCDVNhGVg
[考研] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:15 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:39 by CgyNCDVNhGVg
[教师之家] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:26 by C79jjtjAKjEn
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 08:02 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:46 by C79jjtjAKjEn
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:25 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
信息提示
请填处理意见