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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 如果质粒构建时目的基因方向反了，对构建稳转细胞株有没有影响？
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wwsw38

铁虫 (小有名气)

[交流] 如果质粒构建时目的基因方向反了，对构建稳转细胞株有没有影响？ 已有3人参与

如果质粒构建时目的基因方向反了，对构建稳转细胞株有没有影响？谢谢
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为自己加油
1楼 2015-03-19 11:10:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
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要看你是什么目的。如果做表达的话，因为启动子有方向，产物完全不能确定。
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2楼2015-03-19 12:03:22
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wwsw38

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2015-03-19 12:03:22
要看你是什么目的。如果做表达的话，因为启动子有方向，产物完全不能确定。

就是做高表达稳转细胞株啊，产物完全不能确定是什么意思呢？是没有影响的意思吗？
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为自己加油
3楼2015-03-19 14:22:19
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wwsw38

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2015-03-19 12:03:22
要看你是什么目的。如果做表达的话，因为启动子有方向，产物完全不能确定。

但是我是要做稳转细胞，跟载体上的启动子没有关系吧？反正要被随机整合进基因组的啊？
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为自己加油
4楼2015-03-19 15:02:47
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781055707

木虫 (著名写手)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-03-22 15:49:21
是同源性重组，和目的片段两边的质粒序列是由关系的，楼主仔细分析下细胞株的表达吧。我连时，一般都是正向的。
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采菊东篱下，悠然见南山。
5楼2015-03-19 16:05:07
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wwsw38

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-19 16:05:07
是同源性重组，和目的片段两边的质粒序列是由关系的，楼主仔细分析下细胞株的表达吧。我连时，一般都是正向的。

这种转染应该是属于随机整合，不属于同源重组吧？。。。
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为自己加油
6楼2015-03-19 16:24:56
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781055707

木虫 (著名写手)
★
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引用回帖:
6楼: Originally posted by wwsw38 at 2015-03-19 16:24:56
这种转染应该是属于随机整合，不属于同源重组吧？。。。...

转染是随机整合的同源重组。
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采菊东篱下，悠然见南山。
7楼2015-03-19 16:36:19
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781055707

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-19 16:36:19
转染是随机整合的同源重组。...

还有其他的几种转染方式，虽然不是同源重组，但要看楼主细胞系了。
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采菊东篱下，悠然见南山。
8楼2015-03-19 16:42:07
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
★
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会有影响，CMV启动子不在一起了
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
9楼2015-03-21 05:49:51
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