| 查看: 2454 | 回复: 8 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[交流]
请问过柱子纯化之后，跑胶什么都没有啥原因 已有6人参与
|
||||
|
做了好几次了，都是纯化之后的什么都没有，但穿流液就有，我的表达量不是很明显，因为表达低的原因吗。 还有因为表达量不明显的原因，跑粗蛋白的时候能看到那条带，有时候又感觉看不到，所以我不是很确定我的表达出来了，因为实验室做不了western，但我感觉应该有。 没有表达原因大吗。还有什么别的原因吗 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白表达纯化与检测 |
» 猜你喜欢
国自然面上和省基金B类撒花
已经有9人回复
-
华师大读博
已经有5人回复
-
又一批高校组建人工智能学院 师资行吗 不是骗人吗
已经有5人回复
-
急需审稿人！！！
已经有3人回复
-
申博/考博
已经有8人回复
-
295分求调剂
已经有6人回复
-
一志愿中科大材料与化工，353分还有调剂学校吗
已经有13人回复
-
085600材料与化工调剂
已经有6人回复
-
有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业
已经有7人回复
-
337求调剂
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 各位大神，求助：PCR产物纯化后没有条带了……
已经有34人回复
- 蛋白透析过程中出现浑浊
已经有18人回复
- 超声破碎后跑胶有拖尾，是蛋白降解还是？
已经有5人回复
- 目的基因片段胶回收后酶切，然后再跑胶后发现条带很弱，怎么改进（求助）
已经有8人回复
- 今天你纯化蛋白了吗？跪求柱子挂不好的原因。。。。
已经有15人回复
- 关于变性条件下his-tag重组融合蛋白不结合镍柱以及部分结合镍柱情况
已经有17人回复
- 过硅胶柱时流动相出错了
已经有17人回复
- 胶回收和DNA纯化
已经有6人回复
- 过柱子纯化问题
已经有18人回复
- 【求助/交流】DNA纯化问题
已经有23人回复
12一笑而过
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1503.4
- 散金: 6
- 帖子: 79
- 在线: 31小时
- 虫号: 2168556
- 注册: 2012-12-05
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
7楼2015-03-12 16:05:17
linxi8579
铜虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3983.2
- 散金: 87
- 帖子: 473
- 在线: 51.8小时
- 虫号: 620942
- 注册: 2008-10-09
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2015-03-08 21:58:53
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
我也做这个，用的生工公司的柱子（ni柱） 1、穿透液有是正常的，但如果只有穿透液有，那就是挂柱子不好的原因了，挂的不好解决方法有（我是从木虫总结出来的） （1） 洗脱条件过于温和（组氨酸标签的蛋白质仍绑定）：通过咪唑梯度洗脱或降低pH值至最佳洗脱条件。 （2） 蛋白质沉淀或在柱中：尝试清洁剂或改变NaCl浓度或在变性（展开）条件（使用4-8尿素或4-6盐酸胍）洗脱，以除去沉淀的蛋白质。在接下来的实验中，减少样品的量，或减少蛋白质通过用线性梯度的咪唑代替浓度咪唑洗脱。 （3） 非特异性疏水性或其他相互作用：在洗脱缓冲液添加非离子洗涤剂（例如，0.2％的Triton X-100）或改变氯化钠浓度。 （4） 样品中和/或结合缓冲液的咪唑浓度太高：该蛋白质被包被于穿透液中。做实验时应减少样品和/结合缓冲液的咪唑浓度。 （5） 靶蛋白可能不是组氨酸标签如预期：确认DNA序列。分析诱导前的样品，例如，蛋白的Western印迹实验。 （6） 组氨酸标签可能不充分暴露：将蛋白质在发现流过的材料。在尿素或盐酸胍进行包涵体折叠蛋白纯化。 2、表达量低也是一个原因，因为纯化有损失，另外蛋白纯化时被高度稀释了，如果表达量太低，那后期纯化不明显。建议你先用超滤膜超滤浓缩一下再跑胶试试，如果不行，你可以再优化一下表达条件，表达量高了再做纯化（我是等不及了，要毕业了有木有，做不出来都是泪啊） 3、祝你成功，共勉吧，呜呜 |
4楼2015-03-09 08:40:54
5楼2015-03-09 17:56:14
5