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铁杆木虫 (著名写手)

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[求助] 关于表达Flag标签蛋白的问题已有1人参与

我的实验目的是想收集带Flag标签的蛋白，打算是想先做质粒稳转293T细胞，然后收集带Flag标签的表达蛋白，
现在手头上没有带Flag的质粒，想咨询一下用什么质粒比较好，
另外我想自己设计一段Flag序列，加到我目的基因的前面，但别人说尽量别自己构建标签，不知道该怎么办了。（因Sigma的Flag-CMV-10带的Neo抗性，293T基本对Neo无感，所以想换个抗性的，能在293T里做出稳转的。）

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1楼 2015-03-07 20:32:08

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【答案】应助回帖

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Flag标签很短啊，长度才8个氨基酸（DYKDDDDK），可以通过引物融入目的蛋白的N端或C端，至于用什么载体，你们实验室转293T比较成熟的载体都可以，不需要非得用带Flag标签的其他商业化载体。
Flag tag：DYKDDDDK，参考序列：GATTACAAGGATGACGACGATAAG

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