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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 关于表达Flag标签蛋白的问题 已有1人参与

我的实验目的是想收集带Flag标签的蛋白,打算是想先做质粒稳转293T细胞,然后收集带Flag标签的表达蛋白,
现在手头上没有带Flag的质粒,想咨询一下用什么质粒比较好,
另外我想自己设计一段Flag序列,加到我目的基因的前面,但别人说尽量别自己构建标签,不知道该怎么办了。(因Sigma的Flag-CMV-10带的Neo抗性,293T基本对Neo无感,所以想换个抗性的,能在293T里做出稳转的。)
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ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
Flag标签很短啊,长度才8个氨基酸(DYKDDDDK),可以通过引物融入目的蛋白的N端或C端,至于用什么载体,你们实验室转293T比较成熟的载体都可以,不需要非得用带Flag标签的其他商业化载体。
Flag tag:DYKDDDDK,参考序列:GATTACAAGGATGACGACGATAAG
2楼2015-03-08 12:54:42
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