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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » pET28a/pET-32a质粒的BamHI/XhoI双酶切
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五维度的爱

金虫 (小有名气)

[求助] pET28a/pET-32a质粒的BamHI/XhoI双酶切 已有8人参与

pET28a/pET-32a质粒的BamHI/XhoI双酶切后，出现很多条带，同样的质粒用Sal I和Not I双酶切时，就只有单一的一条带；BamH I/XhoI双酶切别的质粒比如pGEX-4t-1载体时，也能得到单一的一条带，说明内切酶应该是没问题；请问大家有遇到过这种情况吗？

pET28a/pET-32a质粒的BamHI/XhoI双酶切
2.jpg
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1楼 2015-02-07 10:48:39
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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五维度的爱: 金币+2, ★有帮助 2015-02-07 13:25:25
分析一下你的序列中是否存在多个酶切位点
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2楼2015-02-07 12:36:30
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五维度的爱

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 大海一孤舟 at 2015-02-07 12:36:30
分析一下你的序列中是否存在多个酶切位点

我自己的序列中不含这个酶切位点
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3楼2015-02-07 13:25:51
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
五维度的爱: 金币+1 2015-02-10 16:50:20
你是在多克隆位点上切的吗.....

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2015-02-07 18:13:17
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-02-09 10:37:08
五维度的爱: 金币+1 2015-02-10 16:50:15
最好测序吧。因为你自己的菌液和现有的序列可能不匹配了，或者别人改动过酶切位点而你不知道。
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5楼2015-02-09 10:26:37
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浅语8905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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五维度的爱(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-02-09 22:13:00
五维度的爱: 金币+1 2015-02-10 16:50:11
应该是质粒的序列发生了改变，最好测序
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6楼2015-02-09 10:59:26
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
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五维度的爱: 金币+1 2015-02-10 16:50:07
BamHI好像有非特异性，NEB有HF-Bam HI，可以尝试一下。
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7楼2015-02-09 13:42:09
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匿名

★
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五维度的爱: 金币+1 2015-02-10 16:50:01
本帖仅楼主可见
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8楼2015-02-09 13:57:12
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zshw_001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
五维度的爱: 金币+1 2015-02-10 16:49:54
艾玛，这片段被你切的烯碎啊。。。
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永远相信未知的总是美好的！
9楼2015-02-09 16:55:31
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日子妞儿

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

切下来的碱基太少吧
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我是黑妞儿 哈哈
10楼2015-07-11 20:00:53
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