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黄太帝

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[求助] 试剂盒提土壤微生物总DNA遇到的问题已有3人参与

如题，最近用试剂盒提完后，产品DNA经过PCR扩增后跑1％的琼脂糖凝胶电泳，条带不是很亮，有的样品条带都没有，扩增体系的药品试剂全是新买的，这是怎么回事，请教各位大神，谢谢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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做只快乐的小虫快乐得学习

1楼 2015-01-29 23:08:30

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logowang

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
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黄太帝(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-02-20 22:01:29

分两部分，
一，提取的DNA是否有过检测，含量是否足够，以及是否含有RNA蛋白等杂质，如果DNA本身质量太差，不要期待PCR能得到很好结果。

二，PCR扩增不出条带的原因太多了，建议你去从PCR相对应的原理和问题去找资料，比如你的引物设计是否正确，盐离子浓度是否合适，退火温度是否正确，以及延伸时长够不够，这些小细节都会导致PCR扩增不出。

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2楼2015-01-29 23:16:50

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distant616

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
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黄太帝(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-02-20 22:01:51

1、提取后的DNA是否跑胶，跑胶后的结构怎么样。
2、提取后的DNA可以用nanodrop测量一下浓度和纯度，为了确定PCR用量做准备，考虑DNA是否需要浓缩和稀释。
3、PCR扩展的条件和引物都会对结果又很大的影响，这个还需要针对DNA和引物进行实验。

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3楼2015-01-30 11:04:18

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tomjena2015

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【答案】应助回帖

To get rid of humic acid is the key step for obtain high quality total DNA. However, when you try to split DNA and humic acid, you always have a huge loss of DNA during the purification. You need to reach a balance. Get enough DNA for amplification and as little as humic acid which will not inhibit the PCR.