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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 试剂盒提土壤微生物总DNA遇到的问题
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黄太帝

新虫 (正式写手)

[求助] 试剂盒提土壤微生物总DNA遇到的问题 已有3人参与

如题，最近用试剂盒提完后，产品DNA经过PCR扩增后跑1％的琼脂糖凝胶电泳，条带不是很亮，有的样品条带都没有，扩增体系的药品试剂全是新买的，这是怎么回事，请教各位大神，谢谢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-01-29 23:08:30
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logowang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
黄太帝(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-02-20 22:01:29
分两部分，
一，提取的DNA是否有过检测，含量是否足够，以及是否含有RNA蛋白等杂质，如果DNA本身质量太差，不要期待PCR能得到很好结果。

二，PCR扩增不出条带的原因太多了，建议你去从PCR相对应的原理和问题去找资料，比如你的引物设计是否正确，盐离子浓度是否合适，退火温度是否正确，以及延伸时长够不够， 这些小细节都会导致PCR扩增不出。
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2楼2015-01-29 23:16:50
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distant616

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
黄太帝(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-02-20 22:01:51
1、提取后的DNA是否跑胶，跑胶后的结构怎么样。
2、提取后的DNA可以用nanodrop测量一下浓度和纯度，为了确定PCR用量做准备，考虑DNA是否需要浓缩和稀释。
3、PCR扩展的条件和引物都会对结果又很大的影响，这个还需要针对DNA和引物进行实验。
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3楼2015-01-30 11:04:18
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tomjena2015

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

To get rid of humic acid is the key step for obtain high quality total DNA. However, when you try to split DNA and humic acid, you always have a huge loss of DNA during the purification. You need to reach a balance. Get enough DNA for amplification and as little as humic acid which will not inhibit the PCR.   
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4楼2015-02-20 04:16:49
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