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木欣欣60

新虫 (小有名气)

[求助] 做菌p时空载也能跑出目的条带 已有6人参与

现已将目的基因与表达载体连接转化,但是挑菌时做菌p用空的表达载体质粒去跑PCR,结果发现和目的片段有同样的大小,导致菌P都无法筛出阳性克隆,结果拿去测序,全是失败。有哪位大神能帮我分析下吗?空的表达载体pcr能p出目的基因的大小片段,这种情况正常不?
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

引用回帖:
4楼: Originally posted by 木欣欣60 at 2015-01-27 21:08:17
不是,我的基因才500bp左右,所用载体为植物过表达载体pbi121,我把之间比对过,也没多少重复的序列啊,我就不知道是怎么回事了,导致我自己菌p做了也没用,太多的假阳性存在了。...

板中加入IPTGX-AL了吗
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
5楼2015-01-27 21:20:01
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-01-27 21:49:17
菌P时建议用载体的通用引物P,另外,P时加阴性、阳性对照
2楼2015-01-27 16:51:13
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-01-27 21:49:26
你的基因多长啊,是不是和载体一样长度?用M13鉴定吧!很给力!
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
3楼2015-01-27 20:43:27
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木欣欣60

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2015-01-27 20:43:27
你的基因多长啊,是不是和载体一样长度?用M13鉴定吧!很给力!

不是,我的基因才500bp左右,所用载体为植物过表达载体pbi121,我把之间比对过,也没多少重复的序列啊,我就不知道是怎么回事了,导致我自己菌p做了也没用,太多的假阳性存在了。
顺顺利利做实验,高高兴兴搞科研,幸幸福福地毕业。
4楼2015-01-27 21:08:17
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