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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 做菌p时空载也能跑出目的条带
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木欣欣60

新虫 (小有名气)

[求助] 做菌p时空载也能跑出目的条带 已有6人参与

现已将目的基因与表达载体连接转化，但是挑菌时做菌p用空的表达载体质粒去跑PCR，结果发现和目的片段有同样的大小，导致菌P都无法筛出阳性克隆，结果拿去测序，全是失败。有哪位大神能帮我分析下吗？空的表达载体pcr能p出目的基因的大小片段，这种情况正常不？
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顺顺利利做实验，高高兴兴搞科研，幸幸福福地毕业。
1楼 2015-01-27 16:23:36
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人
引用回帖:
8楼: Originally posted by 木欣欣60 at 2015-01-28 10:08:47
这是？我们实验室就按普通的LB加KAN配方进行配置培养板。我用同样的恢复液200u去涂，第一次长了很多，但测序都失败。第二次涂200u，一个都没长。真是痛苦啊~~~...

200ul要是少就多涂一点，试一试
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
10楼2015-01-28 11:29:32
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-27 21:49:17
菌P时建议用载体的通用引物P，另外，P时加阴性、阳性对照
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2楼2015-01-27 16:51:13
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-27 21:49:26
你的基因多长啊，是不是和载体一样长度？用M13鉴定吧！很给力！
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
3楼2015-01-27 20:43:27
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木欣欣60

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2015-01-27 20:43:27
你的基因多长啊，是不是和载体一样长度？用M13鉴定吧！很给力！

不是，我的基因才500bp左右，所用载体为植物过表达载体pbi121，我把之间比对过，也没多少重复的序列啊，我就不知道是怎么回事了，导致我自己菌p做了也没用，太多的假阳性存在了。
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顺顺利利做实验，高高兴兴搞科研，幸幸福福地毕业。
4楼2015-01-27 21:08:17
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