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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

[求助] pET-28a琼脂糖凝胶电泳这样的结果,是什么原因?已有3人参与

提取的质粒pET-28a的质粒,琼脂糖凝胶电泳的结果如图所示。左边是4500的marker,最右边是10000的marker,最亮的那条带是5000bp。
   以前没做过质粒,检测结果这样,正常么?
   求各位虫友不惜赐教!

pET-28a琼脂糖凝胶电泳这样的结果,是什么原因?
UVP00213Jan222015_副本.jpg
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喜欢生物,所以想好好研究下去!
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wu-ke-da(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-26 20:13:43
楼上的你家质粒跑出来是这样?明显是提的不行吗,都没有主带啊,或者是你叫配的不行,我们都是跑的但一条带或者有两条带
3楼2015-01-25 22:41:29
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普通回帖

liuwukang

新虫 (小有名气)

质粒大小是多少?条带挺正常的,质粒跑出来都是差不多这样

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2015-01-25 22:31:59
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shengchen

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wu-ke-da(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-26 20:13:57
质粒理论上跑出有三条带,分别是超螺旋,缺刻和线性。其中超螺旋一般浓度最高,而线性的应该和你的理论长度一致。通常可能只见到超螺旋的带,或者见到超螺旋和缺刻的,而见不到线性的。楼主你自己分析看看吧。
凡人皆有一死,凡人必须侍奉
4楼2015-01-25 23:18:24
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liuwukang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 红卫大兵 at 2015-01-25 22:41:29
楼上的你家质粒跑出来是这样?明显是提的不行吗,都没有主带啊,或者是你叫配的不行,我们都是跑的但一条带或者有两条带

我提出来的质粒如果不做稀释直接跑,就会出现跟他差不多的样子,但稀释一下就会比较好,一般两个条带,前面一条亮,后面一条会比较暗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2015-01-25 23:39:26
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
2楼: Originally posted by liuwukang at 2015-01-25 22:31:59
质粒大小是多少?条带挺正常的,质粒跑出来都是差不多这样

5300bp左右,正常么?
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6楼2015-01-26 08:31:31
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
5楼: Originally posted by liuwukang at 2015-01-25 23:39:26
我提出来的质粒如果不做稀释直接跑,就会出现跟他差不多的样子,但稀释一下就会比较好,一般两个条带,前面一条亮,后面一条会比较暗
...

一般稀释多少倍呢?是不是后面的一条带才是跟实际大小差不多大的
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7楼2015-01-26 08:32:48
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
4楼: Originally posted by shengchen at 2015-01-25 23:18:24
质粒理论上跑出有三条带,分别是超螺旋,缺刻和线性。其中超螺旋一般浓度最高,而线性的应该和你的理论长度一致。通常可能只见到超螺旋的带,或者见到超螺旋和缺刻的,而见不到线性的。楼主你自己分析看看吧。

那缺刻的呢?我感觉能隐隐约约看到三条带,第一条和第三条比较浅,中间一条很亮,但是第三条的大小跟理论长度差不多,这样看来的话就比较正常了?
喜欢生物,所以想好好研究下去!
8楼2015-01-26 08:35:05
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liuyuchang06

至尊木虫 (文坛精英)

博士

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
正常的,我也遇到过,酶切后任然可以连目的片段
9楼2015-01-26 08:56:28
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liuwukang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by wu-ke-da at 2015-01-26 08:32:48
一般稀释多少倍呢?是不是后面的一条带才是跟实际大小差不多大的...

你这个10000的marker跑的有点问题吧,但是跟4500的marker比5300是差不多的,我一般稀释个3到4倍吧,看提出来浓度多少,我都是两条带,即使有三条那一条我也没看见可能太淡了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
10楼2015-01-26 09:37:30
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